检测原理

双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）。微孔板预包被抗人Protein S抗体，加入样本/标准品后，游离Protein S与固相抗体结合。加入生物素标记检测抗体，再结合链霉亲和素-HRP。经TMB底物显色，颜色深度与Protein S浓度成正比。

用途

定量检测人血清、血浆（枸橼酸钠/EDTA抗凝）中的 总Protein S抗原。

注：如需测游离型Protein S或活性，请选用专用试剂盒。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（96T） | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 1块（12条×8孔） | 2-8℃干燥 |

| Protein S标准品 | 6管（0, 5, 15, 30, 60, 120 ng/mL） | -20℃ |

| 生物素标记检测抗体 | 1瓶（12mL） | 2-8℃（避光）|

| 链霉亲和素-HRP | 1瓶（12mL） | 2-8℃ |

| TMB底物液 | 1瓶（12mL） | 2-8℃（避光）|

| 终止液 (2M H₂SO₄) | 1瓶（12mL） | 2-8℃ |

| 洗涤缓冲液 (20×浓缩) | 1瓶（50mL） | 2-8℃ |

| 样本稀释液 | 1瓶（20mL） | 2-8℃ |

| 封板膜 | 3张 | RT |

样本要求

样本类型：血清、枸橼酸钠/EDTA血浆。

预处理：

血浆：2500×g 离心15分钟，移除沉淀。

血清：血液室温静置30分钟，离心分离。

保存：2-8℃可存7天，-20℃以下长期保存（避免反复冻融）。

稀释：用样本稀释液1:20稀释（根据预期浓度调整）。

检测步骤

标准品/样本加入：100μL/孔，37℃孵育60分钟。

洗涤：洗板3次（1×洗涤缓冲液）。

加检测抗体：100μL生物素化抗体，37℃孵育30分钟。

加酶结合物：100μL链霉亲和素-HRP，37℃30分钟（避光）。

显色：加90μL TMB，37℃避光反应10-20分钟（显蓝色）。

终止：加50μL终止液（变黄色）。

读值：450nm波长，630nm为参比，10分钟内完成。

标准曲线与计算

| 标准品浓度 (ng/mL) | 0 | 5 | 15 | 30 | 60 | 120 |

| 典型OD值范围 | 0.05-0.1 | 0.2-0.3 | 0.5-0.7 | 1.0-1.3 | 1.8-2.2 | 2.5-3.0 |

软件拟合曲线：四参数逻辑函数（推荐）或对数坐标线性回归。

关键性能参数

| 项目 | 参数值 |

| 检测范围 | 1.5 ng/mL - 180 ng/mL |

| 最低检出限（LOD）| 0.4 ng/mL |

| 精密度 | 板内CV% < 8%，板间CV% < 12% |

| 回收率 | 85-115% |

| 特异性 | 与人Protein C无交叉反应，与小鼠/大鼠<0.1%|

注意事项

仅限研究使用（RUO），临床诊断需经本地监管批准。

终止液为强酸！避免接触皮肤，溅落后用水冲洗。

TMB遇光敏感，显色时间需预实验优化。

样本避免脂血、溶血，否则需特殊处理。

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