检测原理

采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）：

预包被板：微孔板预包被抗人Protein Z抗体（捕获抗体）。

样本结合：样本中的Protein Z与捕获抗体结合。

检测抗体结合：加入生物素标记抗人Protein Z抗体（检测抗体），形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

信号放大：添加链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶），与生物素结合。

显色：加入TMB（四甲基联苯胺）底物，HRP催化产生蓝色产物。

终止与读数：加入终止液变黄色，在450nm波长下测定吸光度（OD值）。

试剂盒组分

| 组分名称 | 规格（96孔） | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 12孔×8条 | 2–8°C干燥避光 |

| Protein Z标准品（冻干） | 2管（40ng/管）| -20°C |

| 检测抗体（生物素标记） | 1瓶（0.5mL） | 2–8°C |

| 链霉亲和素-HRP | 1瓶（1.0mL） | 2–8°C |

| TMB底物溶液 | 1瓶（10mL） | 2–8°C避光 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10mL） | 室温避光 |

| 洗涤液（20×浓缩） | 1瓶（30mL） | 室温 |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

样本处理指南

| 样本类型 | 处理要求 |

| 血清 | 室温凝血后离心（1000×g, 10分钟），避免溶血 |

| 血浆 | 抗凝剂：推荐柠檬酸盐或EDTA（避免肝素干扰） |

| 保存条件 | -80°C分装，避免反复冻融（最多3次） |

标准曲线范围

0.2 ng/mL – 40 ng/mL（梯度稀释后浓度：40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0 ng/mL）

操作步骤

试剂复溶：标准品用1mL去离子水溶解。

稀释样本：建议血清/血浆按1:10稀释。

加样孵育：标准品/样本100μL/孔，37°C孵育1小时。

加检测抗体：100μL/孔，37°C孵育45分钟。

加酶标试剂：100μL/孔，37°C避光孵育30分钟。

洗涤：PBST洗板5次（自动洗板机）。

显色：加TMB 90μL/孔，室温避光15分钟。

终止：加终止液50μL/孔。

读数：酶标仪450nm波长（校正波长630nm）。

计算浓度

制作标准曲线（OD值 vs 浓度，Logistic四参数拟合）。

样本浓度从曲线方程自动计算。

性能参数

| 项目 | 性能 |

| 灵敏度 | 最低检测值：0.1 ng/mL |

| 精密度 | 板内/板间CV < 8% |

| 回收率 | 85–115% |

| 特异性 | 无交叉反应（Protein Z依赖型蛋白酶抑制剂除外） |

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