产品概述

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测人血清、血浆或其他体液样本中的蛋白脂质蛋白抗体（PLP）浓度，适用于科研用途，不可用于临床诊断。

实验原理

固相包被：微孔板预包被纯化的人PLP抗体作为固相捕获抗体。

抗原结合：样本中的PLP与固相抗体结合，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色反应：洗涤后加入底物TMB，在HRP催化下产生蓝色产物，终止液（酸）作用后转为黄色，其吸光度（OD值）与样本中PLP浓度正相关。

定量分析：通过450 nm波长测定OD值，结合标准曲线计算浓度。

试剂盒组成

96孔配置（48孔配置按比例减半）：

预包被微孔板：1块（96T）

PLP标准品（400 ng/ml）：1瓶（0.6 ml）

空白对照：1瓶（1.0 ml）

生物素标记PLP抗体：1瓶（6 ml）

亲和素-HRP结合物：1瓶（10 ml）

洗涤缓冲液（20×浓缩液）：1瓶（20 ml）

底物A/B：各1瓶（6 ml）

终止液：1瓶（6 ml）

封板膜：1张

样本要求

适用样本：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、脑脊液、细胞培养上清等。

样本处理：避免反复冻融，离心去除颗粒物，2-8℃短期保存（≤24小时），长期储存需-20℃或-80℃。

操作步骤

标准品稀释：用标准品稀释缓冲液梯度稀释至所需浓度（建议0、25、50、100、200、400 ng/ml）。

加样：每孔加入50 μl标准品或样本，37℃孵育30分钟。

洗涤：弃液后每孔加洗涤液300 μl，静置30秒后弃去，重复5次。

酶标抗体孵育：每孔加入100 μl HRP标记抗体，37℃孵育30分钟，再次洗涤。

显色：加入底物A/B各50 μl，避光反应15分钟。

终止与检测：加入50 μl终止液，15分钟内于450 nm读取OD值（建议双波长校正：630 nm）。

注意事项

保存条件：未开封试剂盒2-8℃保存，有效期6个月；开封后酶标板需密封防潮。

质量控制：建议每批次实验设置复孔及空白对照，标准曲线R²应≥0.99。

干扰因素：避免溶血、脂血或反复冻融样本。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过四参数拟合（或线性回归）计算样本浓度。

技术参数

检测范围：6.25–400 ng/ml（灵敏度≤1.0 ng/ml）

批内/批间变异系数：＜10%/＜15%

交叉反应：与类似结构蛋白无显著交叉反应。

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