技术参数

检测指标 人刀豆素A (Human Concanavalin A, ConA)

检测方法 双抗体夹心 ELISA

检测范围 通常为 0 - 96 ng/L

灵敏度 最低检测浓度通常 1.0 ng/L

样本类型 血清、血浆 (EDTA/肝素抗凝)、组织匀浆、细胞培养上清等

检测波长 450 nm (参考波长 630 nm)

保存条件 2-8℃ 蓝色盖子的试剂通常需冷藏，切勿冷冻

操作流程

平衡：从冰箱取出试剂盒，室温平衡 20-30 分钟。

配液：将 20× 或 30× 浓缩洗涤液用蒸馏水稀释成 1× 工作液。

加样：

标准品孔：加入不同浓度的标准品 50 μL。

样本孔：先加待测样本 10 μL，再加样本稀释液 40 μL（即稀释 5 倍，具体比例需参照说明书）。

空白孔：不加样，只加试剂。

温育：除空白孔外，每孔加入酶标试剂（HRP标记的检测抗体）100 μL，37℃ 温育 60 分钟。

洗板：弃去孔内液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1 分钟后甩干，重复 5 次。

显色：每孔加入底物 A 和 B 各 50 μL，37℃ 避光孵育 15 分钟。

终止：每孔加入终止液 50 μL，15 分钟内用酶标仪在 450 nm 波长下测定 OD 值。

注意事项

样本处理：

血清：需在室温放置 2 小时或 4℃ 过夜，离心分离，避免溶血。

血浆：可使用 EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

保存：如果不立即检测，样本应分装后冻存于 -20℃，避免反复冻融。

洗涤操作：洗板是关键。如果洗涤不彻底，背景会很高；洗涤过度则可能导致信号丢失。手工洗板时，拍板要干脆，不要让孔壁残留水珠。

显色控制：加入底物后，要在避光条件下反应。如果背景过高，可以适当缩短显色时间；如果是高敏试剂盒，更要严格控制时间。

标准曲线：每次实验都必须重新做标准曲线，不能使用旧数据。使用 Excel 或酶标仪自带软件绘制曲线（R² 应 ≥ 0.99）。

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