人半胱氨酰白三烯(CysLTs)ELISA试剂盒

核心特性

检测原理：通常采用竞争抑制法或双抗体夹心法（具体以试剂盒说明书为准）。竞争抑制法中，样本中的CysLTs与酶标记的CysLTs竞争结合包被在酶标板上的特异性抗体，通过测定酶催化底物显色的吸光度，与标准曲线比较得出样本中CysLTs的浓度，颜色深浅与样本浓度呈负相关；双抗体夹心法原理类似前述IL-1等试剂盒，颜色深浅与样本浓度呈正相关。

检测样本类型：血清、血浆、肺泡灌洗液、支气管肺泡灌洗液、细胞培养上清液、组织匀浆等生物液体样本。

特异性：能特异性识别CysLTs（包括LTC4、LTD4、LTE4等），与其他结构类似物或炎症因子交叉反应率低。

试剂盒组成

组分 数量 用途

酶标包被板 1块（96孔） 预包被抗人CysLTs特异性抗体

CysLTs标准品 1套（通常5-6瓶，冻干或液体） 用于绘制标准曲线，确定样本浓度范围

酶标记物（HRP标记） 1瓶 标记有辣根过氧化物酶的抗体或抗原，用于显色反应

样本稀释液 1-2瓶 用于稀释标准品和待检测样本

底物溶液（TMB） 1瓶 酶促反应显色底物，一般为无色液体，经HRP催化后显蓝色，终止后变黄色

浓洗涤液 1瓶（浓缩型） 用于洗涤酶标板，去除未结合物质，使用前需按比例稀释

终止液（如2N H₂SO₄） 1瓶 终止酶促反应，使显色稳定以便读数

封板膜 2-3张 温育时防止液体蒸发和污染

操作要点

样本处理：

血清/血浆：采集后尽快离心分离，避免溶血，若不能立即检测，应分装后-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。

肺泡灌洗液等：离心去除细胞和杂质后取上清，按说明书要求进行适当稀释。

组织匀浆：取适量组织，加入预冷的PBS或专用匀浆缓冲液，冰浴匀浆后离心取上清。

实验流程

试剂准备：将试剂盒从冷藏环境中取出，平衡至室温（通常15-30分钟）；按说明书要求稀释浓洗涤液、标准品（若为冻干品需用指定稀释液复溶并静置一定时间）。

加样：在酶标包被板的标准品孔、样本孔中分别加入一定量的标准品溶液或稀释后的样本，然后加入酶标记物，轻轻振荡混匀。

温育：用封板膜封板，置于37℃恒温箱中温育一定时间（如60分钟）。

洗涤：小心揭开封板膜，弃去孔内液体，拍干，用稀释好的洗涤液充分洗涤各孔（通常洗涤4-5次，每次浸泡1-2分钟），最后拍干。

显色：每孔加入底物溶液（TMB），轻轻混匀，37℃避光温育一定时间（如15-30分钟），至标准品孔出现明显的颜色梯度。

终止：每孔加入终止液，轻轻振荡混匀，此时蓝色（若用TMB底物）应变为黄色。

测定：在酶标仪上，于特定波长（通常450nm，参考波长可设630nm或按说明书要求）测定各孔的吸光度（OD值），建议在加终止液后15分钟内完成测定。

注意事项

实验前仔细阅读试剂盒说明书，严格按照说明书步骤操作，不同试剂盒操作步骤

和试剂用量可能不同。

加样时应将液体加于孔底，避免加在孔壁上，并注意避免产生气泡，加样量要准确。

洗涤是关键步骤，要确保洗涤充分，以减少非特异性结合，避免假阳性或本底过高。

显色反应时间和温度需严格控制，以保证结果的准确性和重复性。

标准品和样本建议做复孔检测，以减少实验误差。
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