人半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)ELISA试剂盒

核心特性

检测原理：采用双抗体夹心法。用纯化的人半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)，再与HRP标记的半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人半乳糖6硫酸酯酶(Gal-6S)的浓度。

检测样本类型：血清、血浆、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆等生物液体样本。

特异性：可同时检测天然或重组的Gal-6S，与其他相关蛋白无交叉反应。

样本要求：不能检测含NaN₃的样品，因NaN₃抑制辣根过氧化物酶(HRP)的活性。

试剂盒组成

（以典型96T规格为例）

组分 数量 用途

酶标包被板 1×96孔 预包被抗人Gal-6S特异性抗体

标准品（450U/L） 0.5ml×1瓶 用于绘制标准曲线，确定样本浓度范围

标准品稀释液 1.5ml×1瓶 稀释标准品

酶标试剂 6ml×1瓶 用于显色反应

样品稀释液 1瓶 稀释样品

显色剂A液 1瓶 显色反应底物

显色剂B液 1瓶 显色反应底物

浓缩洗涤液（20倍或30倍） 1瓶 洗涤未结合物质，需稀释使用

终止液 1瓶 终止酶促反应，使颜色稳定

操作要点

样本处理：

血清：室温血液自然凝固10 - 20分钟，离心20分钟左右（2000 - 3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

血浆：根据标本要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10 - 20分钟后，离心20分钟左右（2000 - 3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000 - 3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

细胞培养上清：检测分泌性成份时，用无菌管收集，离心20分钟左右（2000 - 3000转/分），仔细收集上清；检测细胞内成份时，用PBS（PH7.2 - 7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右，通过反复冻融以使细胞破坏并放出细胞内成份。

组织标本：切割标本后称取重量，加入一定量的PBS（PH7.4），用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍保持2 - 8℃温度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分，分装后一份待检测，其余冷冻备用。

标本采集后应尽早提取，提取后尽快实验，若不能马上进行试验，可将标本放于 - 20℃保存，但应避免反复冻融。

实验流程

标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、**孔中分别加标准品100μl，然后在**、**孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、**孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九、第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九、第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为300U/L，200U/L，100U/L，50U/L，25U/L）。

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水按相应倍数稀释后备用。

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

温育：操作同上述温育步骤。

洗涤：操作同上述洗涤步骤。

显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值），测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项

加样后及时放入孵箱，标本较多时要分批操作。

按说明步骤严格控制操作时间，防止孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。

封板温育时，各孔一定要封严，防止阳性标本的液体蒸发，产生周边现象从而导致花板。

用洗板机洗板时，保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后**在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干，还要防止针口有纤维蛋白或异物，以免在洗板过程中产生拖带现象而导致花板。

显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。

加样时保持显色剂不外流；A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。
公司正在出售的产品