人伴侣蛋白10(CPN10)ELISA试剂盒

核心特性

检测原理：采用双抗体夹心法。用纯化的人CPN10抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入CPN10，再与HRP标记的CPN10抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CPN10呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人CPN10的浓度。

检测样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆、脑脊液等生物液体样本。

特异性：可特异性识别天然或重组的人CPN10，与其他伴侣蛋白（如CPN60）及结构相似蛋白无明显交叉反应。

样本要求：样本中避免含NaN₃（会抑制HRP活性），溶血或高血脂样本可能干扰检测，需预处理。

试剂盒组成

（以典型96T规格为例）

组分 数量 用途

酶标包被板 1×96孔 预包被抗人CPN10特异性单克隆抗体

CPN10标准品 1套（通常6瓶，浓度梯度如0、0.312、0.625、1.25、2.5、5ng/mL） 用于绘制标准曲线，确定样本浓度范围

生物素标记检测抗体 1瓶（浓缩型） 特异性结合CPN10，需按说明书稀释后使用

HRP标记亲和素 1瓶（浓缩型） 与生物素标记抗体结合，催化显色反应

样本稀释液 1×20mL 稀释标准品和待检测样本

抗体稀释液 1×10mL 稀释生物素标记检测抗体

亲和素稀释液 1×10mL 稀释HRP标记亲和素

底物溶液（TMB） 1×10mL 酶促显色底物（避光保存）

浓洗涤液（20×） 1×30mL 洗涤未结合物质，使用前需稀释

终止液（2N H₂SO₄） 1×10mL 终止显色反应，使颜色稳定

封板膜 3张 温育时防止液体蒸发和污染

操作要点

样本处理：

血清/血浆：室温静置30分钟，3000rpm离心10分钟取上清，-80℃分装冻存，避免反复冻融。

组织匀浆：取新鲜组织，按1:9比例加入预冷PBS（pH7.4），冰浴匀浆后4℃ 12000rpm离心20分钟，取上清检测。

细胞上清：收集培养上清，3000rpm离心5分钟去除细胞碎片，直接检测或分装冻存。

实验流程

（总耗时约3.5小时）：

  A[试剂平衡至室温（30min）] --> B[标准品梯度稀释]

  B --> C[加样：标准品/样本 100μL/孔，37℃温育60min]

  C --> D[洗涤5次]

  D --> E[加生物素抗体 100μL/孔，37℃温育30min]

  E --> F[洗涤5次]

  F --> G[加HRP亲和素 100μL/孔，37℃温育30min]

  G --> H[洗涤5次]

  H --> I[加TMB底物 90μL/孔，37℃避光显色15min]

  I --> J[加终止液 50μL/孔，酶标仪450nm读数]

注意事项

严格按照说明书稀释试剂，不同试剂不可混用。

加样时避免气泡产生，加于孔底并轻轻混匀。

洗涤步骤需充分（每孔注满洗液，浸泡30秒后弃去），避免交叉污染。

显色时间需根据室温调整，观察到标准品孔出现明显梯度颜色即可终止。

标准品和样本建议做复孔检测，计算平均值以减少误差。
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