人表面活性蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒

产品基本信息

检测方法：双抗体夹心法（酶联免疫吸附法）

样本类型：血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆

适应物种：人（可扩展至大鼠、小鼠等，需验证交叉反应）

保存条件：2-8℃冷藏，避免冷冻；部分组分需-20℃长期保存

有效期：6个月（生产日期见外包装）

检测原理

采用双抗体夹心法：

微孔板预包被抗人SP-A抗体，捕获样本中的SP-A抗原。

加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

通过HRP标记的链霉亲和素与生物素结合，催化TMB底物显色。

450nm波长下测定OD值，标准曲线计算样本浓度。

试剂盒组成

预包被微孔板：96孔（可拆卸）

标准品：冻干粉或液体，浓度梯度为0-XXXX pg/mL（需复溶）

样本稀释液：1×20 mL

检测抗体：生物素标记，1×120 μL

酶结合物：HRP标记亲和素，1×120 μL

TMB底物：1×10 mL

终止液：1×10 mL（酸性溶液）

洗涤缓冲液：20×浓缩液，需稀释后使用

操作步骤

样本准备：

血清/血浆：3000 rpm离心10分钟，避免溶血。

细胞上清：离心去除颗粒物。

组织匀浆：生理盐水匀浆后离心取上清。

保存：-20℃分装，避免反复冻融。

检测流程：

步骤1：平衡试剂至室温（20-25℃），取出所需板条。

步骤2：加标准品/样本50 μL至对应孔，空白孔加稀释液。

步骤3：37℃孵育30-60分钟，洗板5次（每孔300 μL洗涤液）。

步骤4：加检测抗体100 μL，37℃孵育30分钟，洗板。

步骤5：加酶结合物100 μL，避光孵育15分钟，洗板。

步骤6：加TMB底物50 μL，避光显色10-15分钟（蓝色）。

步骤7：加终止液50 μL，15分钟内测OD450nm。

注意事项

质量控制：

标准曲线R²需≥0.99，空白孔OD值应<0.1。

复孔CV≤15%。

干扰因素：

避免脂血、溶血样本；高浓度样本需稀释后复测。

安全提示：

TMB为致癌物，终止液含酸，需佩戴防护装备。
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