人表面活性蛋白D(SP-D)ELISA试剂盒

产品用途

定量检测人血清、血浆、支气管肺泡灌洗液（BALF）或细胞培养上清液中SP-D的浓度。适用于肺部疾病（如ARDS、COPD、肺纤维化）、免疫调控研究和临床诊断。

检测原理

预包被板：微孔板预包被人SP-D特异性捕获抗体。

样本结合：样本中SP-D与捕获抗体结合。

检测抗体结合：加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

酶标记物结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素。

显色反应：加入TMB底物，HRP催化显色（蓝色→黄色）。

终止与测定：加入终止液（硫酸），450nm波长测定OD值（参考波长570/630nm）。

试剂盒组分

| 组分 | 规格 | 数量 ||

| 预包被微孔板 | 96孔（可拆卸） | 1块 |

| 人SP-D标准品 | 浓度：0, 0.156, 0.313, 0.625, 1.25, 2.5, 5, 10 ng/mL | 8管 x 0.5mL |

| 生物素标记检测抗体 | 浓缩液（100×） | 1支 x 120μL |

| HRP-链霉亲和素 | 浓缩液（100×） | 1支 x 120μL |

| 稀释缓冲液（Sample Diluent） | - | 1瓶 x 20mL |

| 洗涤缓冲液（Wash Buffer） | 30×浓缩液 | 1瓶 x 20mL |

| TMB显色液 | 避光保存 | 1瓶 x 10mL |

| 终止液（Stop Solution） | 2M H₂SO₄ | 1瓶 x 10mL |

| 封板膜 | - | 4张 |

需自备设备及材料

酶标仪（450nm）

微量移液器（10μL, 100μL, 1,000μL）及吸头

去离子水、蒸馏水

涡旋混合器、恒温箱（37℃）

洗板机/手动洗板槽

样本制备

| 样本类型 | 处理要求 |

| 血清/血浆 | EDTA/肝素抗凝，离心去除颗粒（2,000×g, 20min），-20℃/-80℃保存，避免反复冻融。 |

| BALF/细胞上清 | 离心澄清（10,000×g, 10min），必要时稀释（用Sample Diluent）。 |

| 组织匀浆 | 用PBS裂解后离心取上清，推荐浓度≥1mg/mL。 |

注意：样本需在检测前恢复至室温，避免溶血/脂血。

检测步骤

配制工作液：按说明书稀释检测抗体、链霉亲和素-HRP和洗涤液。

加样：每孔加标准品/样本100μL，37℃孵育2小时。

洗板：PBS+0.05% Tween-20洗涤3次（每孔300μL）。

加检测抗体：100μL生物素抗体（1×稀释），37℃孵育1小时→洗板3次。

加酶结合物：100μL HRP-链霉亲和素（1×稀释），37℃孵育30分钟→洗板5次。

显色：每孔加90μL TMB（避光），37℃避光孵育20分钟。

终止：加50μL终止液（孔内颜色变黄色）。

读数：5分钟内测定450nm OD值，减去570nm背景值。

标准曲线与计算

以标准品浓度（ng/mL）为横坐标（log尺度），OD₄₅₀为纵坐标绘制曲线。

使用四参数拟合（4PL）或线性回归计算样本浓度。

示例：样本OD=0.85 → 标准曲线查得浓度=3.2 ng/mL

分析性能参数

| 参数 | 值 |

| 检测范围 | 0.156 - 10 ng/mL |

| 灵敏度（最低检出限） | <0.08 ng/mL |

| 精密度（批内/批间CV） | <10% / <15% |

| 回收率 | 85–115% |

| 交叉反应 | 与SP-A、MBL等无显著交叉 |

注意事项

试剂使用前平衡至室温（约30分钟）。

TMB显色液避光，若变蓝禁用。

终止液有腐蚀性，佩戴防护装备操作。

不同样本类型需预实验验证稀释倍数。
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