人丙酮酸脱氢酶E1(PDH E1)ELISA试剂盒

预期用途

本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他生物液体样本中丙酮酸脱氢酶复合体E1组分 (PDH E1) 的蛋白含量。

检测原理概述

包被： 微孔板孔内预包被有抗人 PDH E1 (针对α或β亚基) 的单克隆抗体 (捕获抗体)。

加样： 待测样本或标准品被加入微孔中，样本中的 PDH E1 抗原与孔内固相捕获抗体结合。

洗涤： 去除未结合的物质。

加检测抗体： 加入生物素标记的抗人 PDH E1 抗体 (检测抗体)，与已经结合在孔板上的 PDH E1 抗原的另一表位结合，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

洗涤： 再次去除未结合的生物素标记抗体。

加链霉素亲和素-HRP： 加入辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的链霉素亲和素 (Streptavidin-HRP)。链霉素亲和素会特异性地与生物素结合。

洗涤： 去除未结合的 Streptavidin-HRP。

显色： 加入底物溶液 (通常是 TMB)。HRP 催化底物发生显色反应，生成蓝色产物。

终止反应： 加入酸性终止液 (通常为硫酸溶液)，使蓝色完全转变为黄色。

比色检测： 使用酶标仪在450nm波长下（参考波长通常为620nm或630nm）测定各孔的吸光度值 (OD值)。

定量计算： 根据标准品浓度与对应的OD值绘制标准曲线（通常为四参数logistic曲线拟合）。待测样本中的 PDH E1 浓度可通过标准曲线插值计算得出。

试剂盒组分

预包被96孔微孔板： 1块 (可拆分为8孔*12条)，孔内预包被抗人PDH E1捕获抗体。

人PDH E1标准品 (冻干粉或液体)： 通常6-7个不同浓度梯度（如0, 1.25, 2.5, 5, 10, 20, 40 ng/mL 或其他范围，需复溶或稀释）。

样本稀释液： 用于稀释样本（通常是含蛋白或其他保护因子的缓冲液）。

生物素标记抗人PDH E1检测抗体： 工作浓度（使用时按说明书要求稀释或直接使用）。

Streptavidin-HRP酶结合物： 工作浓度。

洗涤缓冲液 (20-25X)： 浓缩液，需按说明书用去离子水稀释至工作浓度。

底物溶液 (TMB)： 通常为A、B双组分或单一组分。

终止液： 通常为1M或2M硫酸溶液。

封板膜： 用于孵育过程防止蒸腾和污染。

产品说明书： 包含详细的操作步骤和参数。

需要自备的设备与耗材

精准移液器及配套吸头 (不同量程)。

酶标仪 (450nm ± 10nm波长)。

旋涡混合器。

去离子水。

温育箱 (通常为37°C)。

洗板机 (可选，可手动洗涤)。

恒温摇床 (可选)。

一次性试管、量筒等。

样本收集与处理

血清： 全血室温自然凝固10-20分钟，离心10分钟左右 (约2000-3000 rpm)。小心收集上清血清，避免溶血。分装后-20°C或-80°C保存。避免反复冻融。

血浆： 使用EDTA、肝素钠或枸橼酸钠作为抗凝剂收集。采集后30分钟内离心 (约2000-3000 rpm)，分离血浆。分装后-20°C或-80°C保存。避免反复冻融。

细胞培养上清液： 离心去除细胞及碎片后取上清检测，分装后-20°C或-80°C保存。

组织匀浆液： 组织经PBS或其他缓冲液冲洗后，按重量/体积比加入预冷的样本稀释液或PBS，在冰浴条件下使用匀浆器匀浆。离心 (通常 >10000g, 4°C, 10-15分钟) 取上清检测。分装后-20°C或-80°C保存。

其他体液： 遵循无菌原则收集，离心去除杂质后取上清检测。保存方法同上。

检测前： 冷冻样本在检测前应缓慢升温至室温，轻轻混匀，避免产生气泡。如有沉淀，需再次离心后取上清。稀释严格按照说明书要求进行（通常在稀释液中进行）。
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