人波形蛋白(VIM)ELISA试剂盒

产品概述

本试剂盒用于定量检测人血清、血浆、细胞上清液或尿液中波形蛋白(VIM)的含量，采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)，具有高灵敏度和特异性，检测范围为156.25-5000 pg/mL。

试剂盒组成

微孔酶标板：预包被抗VIM抗体（96孔配置：12孔×8条；48孔配置：12孔×4条）。

标准品：0.3 mL×6管（冻干粉或液体）。

样本稀释液：6 mL（96T）/3 mL（48T）。

检测抗体-HRP：10 mL（96T）/5 mL（48T）。

20×洗涤缓冲液：25 mL（96T）/15 mL（48T），需按1:19比例稀释后使用。

底物A/B：各6 mL（96T）/3 mL（48T），避光保存。

终止液：6 mL（96T）/3 mL（48T）。

封板膜、说明书、自封袋等辅助材料。

保存条件与有效期

未开封试剂盒需2-8°C密封保存，有效期6个月。

开封后未使用的板条应密封保存于自封袋中，避免受潮。

标准品及样本建议分装冻存于-20°C（3个月）或-70°C（6个月），避免反复冻融。

实验前准备

试剂平衡：从冷藏环境中取出后，室温平衡15-30分钟，避免直接高温暴露。

洗涤液配制：将20×洗涤缓冲液按1:19比例用蒸馏水稀释（如5 mL浓缩液加95 mL水）。

样本稀释：用应用样品稀释液按1:100比例稀释样本（如10 μL样本加990 μL稀释液）。

操作步骤

加样：

分别加入标准品、待测样本至对应孔位，每孔100 μL，轻轻混匀避免气泡。

覆上封板膜，37°C孵育90分钟。

洗涤：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。

加检测抗体：每孔加入100 μL HRP标记检测抗体，37°C孵育60分钟，再次洗涤。

显色：每孔依次加入底物A/B各50 μL，37°C避光反应15分钟。

终止与读数：每孔加入50 μL终止液，15分钟内于450 nm波长测定OD值。

注意事项

质量控制：

每批次实验需同时检测标准曲线，R²值应≥0.99。

复孔CV值需控制在10%以内。

安全规范：

所有废弃物按生物危害物处理，避免直接接触终止液（含酸性物质）。

不同批号试剂不得混用。

异常处理：

洗涤液结晶可37°C水浴溶解，不影响效果。

显色过深或过浅需调整孵育时间或复查样本稀释比例。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制曲线，通过四参数拟合计算样本浓度。若样本OD值超出范围，需进一步稀释后重测。
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