人补体1抑制物抗体(C1INH)ELISA试剂盒

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心ELISA技术：

预包被抗体：抗人C1INH单抗预包被于微孔板。

样本孵育：样本中C1INH与固相抗体结合。

检测抗体：加入生物素标记的抗C1INH二抗。

信号放大：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素。

显色与终止：TMB显色液→终止液，颜色深度与目标浓度成正比。

检测目标：人血清/血浆/细胞培养上清液中C1抑制物抗体

检测方法：双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）

适用样本类型：血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清

保存条件：2-8°C（未开封），有效期12个月

试剂盒组成

| 组分 | 规格（96孔） | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 1板（8孔×12）| 2-8°C |

| C1INH标准品（冻干粉）| 10ng/vial×2 | -20°C |

| 标准品稀释液 | 6mL | 2-8°C |

| 生物素化检测抗体 | 120μL | -20°C |

| HRP标记链霉亲和素 | 120μL | 2-8°C |

| TMB显色液 | 10mL | 2-8°C（避光） |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10mL | 室温 |

| 洗涤缓冲液（30×） | 20mL | 2-8°C |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

样本处理

血清/血浆：3000rpm离心20分钟，避免溶血和脂血。

细胞培养上清：离心去除杂质，直接上样或短期-20°C保存。

组织匀浆液：裂解离心后取上清，稀释后检测（建议预实验优化稀释比例）。

操作步骤

标准品配制：用1mL稀释液复溶冻干标准品（10ng/mL），梯度稀释至（0.156–10ng/mL）。

加样：每孔加100μL标准品/样本，37°C孵育2小时。

加检测抗体：洗板3次后，每孔加100μL生物素化抗体（1:100稀释），37°C孵育1小时。

加酶结合物：洗板后加100μL HRP-链霉亲和素（1:100），37°C孵育30分钟。

显色与检测：洗板后加90μL TMB，避光室温显色15分钟→终止液50μL→450nm读数（参考波长630nm）。

关键提示：

每次洗涤使用300μL/孔洗涤缓冲液（1×稀释），浸泡30秒后吸干。

避免孔板干燥，严格控制孵育时间。

典型数据

| 标准品浓度（ng/mL） | OD值（均值） |

| 10 | 2.35 |

| 5 | 1.61 |

| 2.5 | 0.92 |

| 1.25 | 0.47 |

| 0.625 | 0.25 |

| 0.156 | 0.08 |

| 空白孔 | ≤0.05 |

灵敏度：0.05 ng/mL

检测范围：0.156–10 ng/mL

回收率：85-115%

批内变异：<8%，批间变异：<12%

结果计算

绘制标准曲线（纵坐标：OD值；横坐标：log浓度）。

使用四参数拟合（4PL）方程计算样本浓度。

稀释样本需乘以稀释倍数（如10倍稀释样本测得2ng/mL，实际浓度=20ng/mL）。

注意事项

试剂盒不可冻结（除冻干标准品和生物素化抗体）。

TMB显色时间根据室温调整（15-30分钟），蓝色过深可能饱和。

高值样本需稀释后复测。
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