预期用途

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法 (Sandwich ELISA)，用于 定量检测 人血清、血浆、细胞培养上清液或组织匀浆等生物样本中 发动蛋白 2 (Dynamin 2, DNM2) 的浓度。

本试剂盒仅供科研使用，不可用于诊断、治疗或其他临床用途。

检测原理

本试剂盒基于 双抗体夹心法原理：

包被： 特异性抗人 DNM2 抗体已预包被在酶标板的微孔板上。

加样与孵育： 将稀释的标准品、待测样本和质控品加入微孔中孵育。样本中的人 DNM2 会与包被在板上的抗体结合形成抗原-抗体复合物。

洗涤： 洗去未结合的物质。

加入生物素化抗体： 加入生物素标记的抗人 DNM2 检测抗体（二抗），该抗体与结合在板上的 DNM2 形成“包被抗体-抗原-生物素化抗体”的夹心结构。

再次洗涤： 洗去未结合的二抗。

加入辣根过氧化物酶标记链霉亲和素 (Streptavidin-HRP)： 加入辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的链霉亲和素，其会特异性地与生物素结合。

再次洗涤： 洗去未结合的 Streptavidin-HRP。

加入显色底物 (TMB)： 加入显色底物 3,3',5,5'-四甲基联苯胺 (TMB)，在 HRP 的催化下产生蓝色产物。

终止反应： 加入终止液，蓝色产物转变为黄色。

检测吸光度 (OD)： 在酶标仪上于 450 nm 波长（参考波长：570 nm 或 630 nm）读取各孔的吸光度值 (OD)。

绘制标准曲线并计算浓度： 标准品浓度与其对应的 OD 值呈正相关关系。绘制标准曲线后，根据样本的 OD 值即可计算出样本中 DNM2 的浓度。

试剂盒组成与储存

预包被微孔板 (96 孔板)： 1 块 (可拆卸)。 (已包被抗人 DNM2 抗体) - 2-8°C 密封储存

人 DNM2 标准品： 通常冻干粉状或液体形式，浓度已知 (例如 100 ng/mL 或类似范围)。使用前需按说明加入指定体积的样本稀释液复溶并配制系列稀释梯度（例如 0, 1.56, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 ng/mL）。 - -20°C 储存 (复溶/稀释后 2-8°C 可短期储存)

样本稀释液： 用于稀释样本（有时与标准品稀释液相同）。 - 2-8°C 储存

生物素化抗人 DNM2 抗体 (检测抗体)： 即用型或浓缩型（需稀释）。 - 2-8°C 储存 (浓缩型需按说明稀释)

链霉亲和素-辣根过氧化物酶 (Streptavidin-HRP) 溶液： 即用型或浓缩型（需稀释）。 - 2-8°C 储存 (避免反复冻融，避光)

洗涤缓冲液 (浓缩液)： 浓缩磷酸盐缓冲液 (通常含吐温 20)。使用前需用蒸馏水或去离子水按指定倍数（如 10×, 20×）稀释至工作浓度。 - 2-8°C 储存 (未开封浓缩液)

显色底物 (TMB)： A液 + B液。 - 2-8°C 储存, 严格避光

终止液： 通常是酸溶液 (如 1M 或 2M H2SO4)。 - 室温储存

封板膜： 用于孵育过程中密封微孔板。 - 室温储存

产品说明书： 1 份 (非常重要！)

储存与稳定性

未拆封的试剂盒应保存在 2-8°C，避免冻存（除非特别说明）。

复溶后的标准品和稀释后的抗体建议 2-8°C 短期储存（通常不超过 1-2 周）。

Streptavidin-HRP 和 TMB 应避光保存。

请参考说明书确定具体试剂盒的有效期，通常为 6个月至1年。

样本类型及要求

血清： 室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心收集血清。避免溶血。分装后 -20°C 或 -80°C 冻存。避免反复冻融。

血浆： 使用肝素钠、EDTA或柠檬酸盐抗凝管收集血浆。离心后分装，-20°C 或 -80°C 冻存。避免反复冻融。避免使用溶血或高脂样本。

细胞培养上清液： 离心去除细胞和碎片，分装后 -20°C 或 -80°C 冻存。

组织匀浆： 将组织用冰冷的 PBS 或生理盐水清洗干净，称重后加入适量裂解液（含蛋白酶抑制剂）进行匀浆。高速离心后取上清液，分装冻存。需明确组织类型和处理方法对结果的影响。

其他体液： 如脑脊液、尿液等，需参照说明书进行特殊处理。

样本准备注意事项：

收集后尽快处理、分装并低温保存。

避免 反复冻融。测定前在冰上或冰箱中解冻，室温充分混匀后离心取上清液。

高脂或溶血样本需特别处理（如离心过滤）以排除干扰。

实验前，必须将样本按说明书要求用样本稀释液进行适当稀释（通常倍数在几倍到几十倍不等）。未经稀释的样本通常不可直接检测。

确保样本不含 NaN3，因为 NaN3 会抑制 HRP 酶活。

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