人补体片段3c(C3c)ELISA试剂盒

产品概述

检测原理：双抗体夹心法（Sandwich ELISA）

检测靶标：人血清、血浆或细胞培养上清液中的补体片段C3c

灵敏度：通常 ≤0.1 ng/mL

检测范围：0.156 - 10 ng/mL（标准曲线范围，可定制）

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养液、尿液（需验证）

种属特异性：人（与其他灵长类可能存在交叉反应）

试剂盒规格：96孔板（含预包被抗体）

保存条件：未开封试剂盒2-8℃保存（有效期12个月）；开封后按组分要求保存

试剂盒组分

| 组分 | 规格 | 数量 | 保存条件 |

| 预包被抗人C3c抗体微孔板 | 8孔×12条 | 1板 | 2-8℃（干燥） |

| 人C3c标准品 | 冻干粉或液体 | 1-2瓶 | -20℃（复溶后分装冻存） |

| 生物素标记检测抗体 | 1.5 mL | 1瓶 | -20℃ |

| Streptavidin-HRP（链霉亲和素-HRP） | 0.5 mL | 1瓶 | -20℃（避光） |

| 样本稀释液 | 10-20 mL | 1瓶 | 2-8℃ |

| TMB显色底物 | 5-10 mL | 1瓶 | 2-8℃（避光） |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 5-10 mL | 1瓶 | 室温 |

| 洗涤液（20-25×浓缩） | 30-50 mL | 1瓶 | 室温（使用前稀释） |

| 封板膜 | | 4张 | 室温 |

操作步骤

样本准备

血清/血浆：离心去除沉淀，1:100稀释（建议初始梯度预实验）。

细胞上清：直接检测或适当稀释。

标准品复溶与梯度稀释

用标准品稀释液复溶至标定浓度（通常为10 ng/mL），依次倍比稀释7个浓度点。

加样与孵育

| 步骤 | 操作 | 时间 | 温度 |

| 1 | 加标准品/样本至微孔板 | 100 μL/孔 | - |

| 2 | 覆盖封板膜，孵育 | 90分钟 | 37℃ |

| 3 | 洗板 | 3次（每次浸泡1分钟） | - |

| 4 | 加生物素标记抗体 | 100 μL/孔 | - |

| 5 | 覆盖封板膜，孵育 | 60分钟 | 37℃ |

| 6 | 洗板 | 3次 | - |

| 7 | 加Streptavidin-HRP | 100 μL/孔 | - |

| 8 | 避光孵育 | 30分钟 | 37℃ |

| 9 | 洗板 | 5次 | - |

| 10 | 加TMB显色液 | 100 μL/孔 | - |

| 11 | 避光显色 | 15-20分钟 | 室温 |

| 12 | 终止反应 | 50 μL/孔终止液 | - |

读数

使用酶标仪在 450 nm波长测定OD值（参考波长630 nm校正）

结果计算

绘制标准曲线：以标准品浓度（log）为横轴，OD450值为纵轴（四参数拟合**）。

样本浓度 = 曲线反推值 × 稀释倍数。

关键性能参数

| 指标 | 典型值 |

| 批内精密度 | CV < 8% |

| 批间精密度 | CV < 10% |

| 回收率 | 85-115%（血清样本） |

| 特异性 | 无交叉反应：C3a、C3b、C4、C5 等 |

| 钩状效应 | 检测上限内无钩状效应 |

注意事项

避免反复冻融样本/试剂，分装保存。

TMB显色时间需优化，强阳性样本需缩短时间。

禁用叠氮钠（NaN₃）作为防腐剂，会抑制HRP活性！

洗涤液需充分稀释（例如：25×浓缩液配制成1×工作液），并确保每孔注满。

临床样本建议检测前进行补体灭活（56℃ 30分钟）以消除活性干扰。
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