人补体片断3a(C3a)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法：

预包被抗人C3a单克隆抗体于微孔板。

样本中C3a与包被抗体结合。

加入生物素标记的抗人C3a二抗，形成“抗体-抗原-二抗”复合物。

添加链霉亲和素-HRP，与生物素结合。

加入TMB显色底物，酶催化显色（蓝色→黄色）。

终止反应后，450nm波长测定吸光度（OD值），浓度与OD值正相关。

样本要求

| 样本类型 | 处理方式 | 保存条件 |

| 血清 | 采集后30min内离心，避免溶血 | -20℃或-80℃冻存 |

| EDTA血浆 | 推荐使用（抑制C3a降解） | 避免反复冻融 |

| 肝素血浆 | 可用，但需验证批次稳定性 | 长期保存需分装 |

| 细胞上清 | 0.22μm过滤，去除颗粒 | 2-8℃可存24小时 |

注意：避免使用枸橼酸盐抗凝血浆（可能干扰检测）。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（96T） | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 12条×8孔 | 2-8℃ (干燥) |

| C3a标准品 | 冻干粉×2支 | -20℃（复溶后2-8℃）|

| 生物素标记检测抗体 | 1.2mL | -20℃避光 |

| 链霉亲和素-HRP | 1.2mL | -20℃避光 |

| TMB显色液A/B | 各6mL | 2-8℃（避光） |

| 终止液 (2M H₂SO₄) | 12mL | 室温 |

| 洗涤液 (20×浓缩) | 50mL | 2-8℃（用前稀释）|

关键性能参数

| 指标 | 数值 |

| 检测范围 | 15.6–1000 pg/mL |

| 灵敏度 | ≤ 4.0 pg/mL |

| 精密度 | 板内CV < 8%，板间CV < 10% |

| 特异性 | 无交叉反应：C3、C5a、C4a |

| 回收率 | 85–115% (人血清验证) |

| 样本用量 | 50 μL/孔 |

| 检测时间 | 2.5小时（不包括样本前处理）|

操作流程

标准品制备：用标准品稀释液复溶，梯度稀释至7个浓度点。

加样：每孔加样本/标准品50μL → 加检测抗体50μL → 覆膜，37℃孵育60min。

洗涤：PBS-T洗板5次。

酶结合：每孔加SA-HRP 100μL → 37℃避光孵育30min → 洗板5次。

显色：每孔加TMB A/B混合液各50μL → 避光室温显色10–20min。

终止：加50μL终止液 → 即刻于450nm读数（参考波长630nm）。

数据处理

计算标准品平均OD值→ 绘制log-log标准曲线（浓度 vs OD）。

使用四参数拟合（4PL）模型计算样本浓度。

公式示例：$$ y = \frac{A-D}{1+(x/C)^B} + D $$

样本浓度超出检测范围时：需用稀释液按比例稀释后复测。

注意事项

避免C3a降解：采血后立即冰浴，使用含蛋白酶抑制剂（如EDTA）的试管。

冻融样本：检测前仅解冻1次，轻柔混匀避免气泡。

批次差异：试剂盒不可混用组分！

临床诊断限制：仅限研究使用（RUO），不用于临床诊断。
公司正在出售的产品