人补体片断4b(C4b)ELISA试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测样品中的人补体片段C4b浓度。微孔板预包被抗人C4b单克隆抗体作为捕获抗体。加入样本或标准品后，其中的C4b被捕获抗体结合。洗涤后加入生物素标记的抗人C4b检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。洗涤后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin）进行信号放大。经TMB底物显色后，测定450nm波长处的吸光值（OD），C4b浓度与OD值呈正相关

检测模式： 双抗体夹心法（Sandwich ELISA）

检测样本类型： 血清、血浆、细胞培养上清液

产品组分（96孔规格）

| 组分 | 数量 | 保存条件 |

| 预包被抗人C4b抗体微孔板 | 96孔/板 | 2-8℃ |

| 人C4b标准品（冻干） | 1管（10ng） | -20℃ |

| 标准品/样本稀释液 | 10mL | 2-8℃ |

| 生物素标记的抗人C4b抗体 | 120μL | -20℃ |

| HRP标记链霉亲和素 | 120μL | -20℃（避光） |

| TMB底物溶液 | 11mL | 2-8℃（避光） |

| 终止液（1M H₂SO₄） | 11mL | 室温 |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩） | 30mL | 室温 |

| 封板膜 | 3张 | 室温 |

性能指标

灵敏度： ≤0.1 ng/mL

检测范围： 0.16 – 10 ng/mL

种属特异性： 人源

交叉反应： 无已知交叉反应（人C4a/C3b等）。

精密度： 板内变异系数CV% < 8%，板间CV% < 10%

回收率： 样本加标回收率85–115%

样本处理

血清/血浆

采集静脉血至不含抗凝剂（血清）或含EDTA/肝素（血浆）的试管。

室温静置30分钟，4℃下以2000×g离心20分钟。

立即分装保存于-80℃，避免反复冻融（最多3次）。

细胞培养上清液

离心去除杂质后取上清。

立即检测或-80℃冻存。

操作步骤

标准品配制： 用稀释液将10ng标准品复溶并梯度稀释为：10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156、0 ng/mL。

加样： 每孔加入100μL标准品/样本，37℃孵育1小时。

洗板： 1×洗涤液洗3次。

加检测抗体： 每孔加入100μL生物素标记抗体，37℃孵育1小时。

洗板： 重复步骤3。

加酶标物： 每孔加入100μL HRP-Streptavidin，37℃避光孵育30分钟。

洗板： 重复步骤3。

显色： 每孔加入90μL TMB底物，室温避光反应15分钟。

终止： 每孔加入50μL终止液，30分钟内检测。

读数： 酶标仪450nm波长测OD值，以标准曲线计算浓度。

数据分析

以标准品浓度（log）为X轴，OD值（log）为Y轴拟合4参数逻辑曲线（4-PL）。

注意事项

试剂组分复溶前需恢复至室温，避免剧烈振荡。

洗涤务必彻底，防止假阳性结果。

TMB底物遇金属和强光易失效，操作需避光。

高浓度样本需稀释后复测，确保落在标准曲线范围内。
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