人补体片断5a(C5a)ELISA试剂盒

试剂盒组成

预包被微孔板：96孔或48孔规格，包被抗人C5a特异性抗体。

标准品：系列浓度C5a标准品（冻干粉或液体），用于建立标准曲线。

检测抗体：生物素标记的抗人C5a抗体。

酶结合物：链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶）复合物。

显色底物：TMB（四甲基联苯胺）溶液，避光保存。

终止液：2M硫酸溶液。

洗涤缓冲液：20×浓缩液，使用前需稀释。

样本稀释液：用于样本的预处理。

检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）

适用样本：血清、血浆、尿液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等生物液体。

操作步骤

样本准备：

血清/血浆需离心去除颗粒物，组织样本需匀浆后离心取上清。

建议样本稀释比例为1:5至1:10（具体依样本类型调整）。

加样与孵育：

向微孔板中加入标准品或待测样本100μL/孔，37℃孵育1小时。

洗涤3次，每次静置30秒后拍干。

检测抗体孵育：

加入生物素标记抗体100μL/孔，37℃孵育30分钟，再次洗涤。

酶结合反应：

加入链霉亲和素-HRP 100μL/孔，37℃避光孵育20分钟，洗涤3次。

显色与终止：

加入TMB底物100μL/孔，室温避光显色10-30分钟（显色时间需优化）。

加入终止液50μL/孔，立即于450nm波长读取吸光度值（参考波长630nm）。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（建议四参数拟合）。

根据样本OD值，从标准曲线中计算C5a浓度。

注意事项

保存条件：

未开封试剂盒保存于-20℃（长期）；开封后2-8℃保存，避免反复冻融。

洗涤液可能出现盐结晶，37℃水浴溶解后使用。

质量控制：

每批次实验需包含阳性对照、阴性对照及空白孔。

样本OD值超出标准曲线范围时，需调整稀释比例重新检测。

其他说明：

不同批号试剂组分不可混用。

显色时间过长可能导致背景升高，建议预实验优化条件。
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