人补体因子D(CFD)ELISA试剂盒

检测方法：双抗体夹心法（Sandwich ELISA）

检测样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素）、细胞培养上清液

灵敏度：≤1.0 pg/mL

检测范围：3.12–200 pg/mL（或同等范围，如 15.6–1000 pg/mL）

特异性：仅检测天然/重组人CFD，不与类似因子交叉反应

保存条件：2–8°C（有效期详见包装盒）

提供规格：96孔板（部分可拆分为8孔x12条）

试剂盒组分清单

| 组分 | 规格 | 数量 |

| 预包被微孔板 | 抗人CFD抗体包被 | 96孔/板 |

| 标准品（重组人CFD） | 200 pg/mL（冻干/液体） | 1支（含稀释液） |

| 生物素化检测抗体 | 100×浓缩液（使用前稀释） | 120 μL |

| 辣根过氧化物酶标记链霉亲和素（SA-HRP） | 100×浓缩液 | 120 μL |

| 样本稀释液 | PBS/Tween缓冲液 | 30 mL |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩） | 含Tween-20的PBS | 20 mL（使用前稀释） |

| 显色底物液（TMB） | A液 + B液 | 各12 mL |

| 终止液 | 2M H₂SO₄溶液 | 12 mL |

| 封板膜 | 透明贴膜 | 4张 |

注：使用前将所有组分恢复至室温（25°C），浓缩液按说明书比例稀释。

样本前处理指南

| 样本类型 | 处理方式 | 短期保存 |

| 血清 | 室温凝血30 min，4°C离心10 min（1000×g） | ≤24h（2–8°C）；≤1月（-20°C） |

| 血浆（EDTA/肝素） | 离心去除血细胞碎片（同上） | 同血清 |

| 细胞上清 | 直接离心（200×g，5 min）取上清 | 避免反复冻融 |

关键提示：样本浓度过高需用样本稀释液预稀释（建议1:5起）。

实验操作流程

标准品/样本加样（100 μL/孔，每孔设复孔）

标准品梯度（200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.12 pg/mL）

空白对照（加稀释液）、样本孔（稀释后）

37°C 温育：60 min

洗涤：甩去液体，加300 μL洗涤缓冲液（1×），重复5次，拍干。

加生物素化抗体：100 μL/孔（工作浓度），37°C 温育30 min。

重复步骤3（洗涤5次）。

加SA-HRP工作液：100 μL/孔，37°C 避光温育15 min。

重复步骤3（洗涤6次）。

显色：加90 μL TMB显色底物，室温避光10–20 min（蓝色）。

终止反应：加50 μL终止液（变黄色）。

读数：立即使用酶标仪测 OD450 nm（参考波长570 nm校正）。

结果计算

计算复孔平均OD值。

以标准品浓度（X）为横坐标，OD值（Y）为纵坐标，拟合四参数曲线方程（Logistic曲线）。

代入样本OD值计算浓度，乘以稀释倍数。

示例公式：

( y = \frac{A - D}{1 + (x/C)^B} + D )（曲线拟合软件自动生成）

性能参数

| 项目 | 数据 |

| 精密度（变异系数CV） | 板内CV <8%；板间CV <12% |

| 回收率 | 85%–110%（添加标准液验证） |

| 干扰验证 | 高血脂/溶血样本偏差 <±15% |

| 检测限（LOD） | 0.5 pg/mL |

| 定量限（LOQ） | 3.12 pg/mL |

注意事项

严格遵守温育时间和温度，避免操作延迟。

终止液为强酸，穿戴防护装备操作。

显色时间需优化（蓝色转深蓝前终止）。

标准曲线 ( R^2 ) ≥ 0.99 方可使用。

非诊断用途（仅限科研使用）。
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