人不耐热肠毒素B亚单位(LTB)ELISA试剂盒

检测类型：双抗体夹心法（Sandwich ELISA）

适用样本：血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆

储存条件：2-8℃（拆封后未使用板条需密封干燥保存于-20℃）

检测原理

包被抗体：微孔板预包被人LTB特异性单克隆抗体。

样本结合：样本中的LTB与包被抗体结合。

检测抗体：加入生物素标记的抗人LTB多克隆抗体。

信号放大：添加链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶）结合物。

显色反应：加入TMB底物，HRP催化显色（蓝色→黄色）。

终止检测：加入终止液，颜色转黄色，450nm波长测定OD值。

试剂盒组成

| 组分 | 规格 | 数量 |

| 预包被LTB抗体微孔板 | 8孔×12条 | 1板 |

| LTB标准品 | 1000 pg/mL | 2支 |

| 生物素标记检测抗体 | 1.5 mL | 1瓶 |

| HRP-链霉亲和素结合物| 6 mL | 1瓶 |

| TMB显色液 | 10 mL | 1瓶 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10 mL | 1瓶 |

| 浓缩洗涤缓冲液（25X）| 50 mL | 1瓶 |

| 样本稀释液 | 20 mL | 1瓶 |

样本处理

| 样本类型 | 预处理建议 |

| 血清/血浆 | 3000 rpm离心10分钟，避免溶血，未使用部分-80℃保存。 |

| 细胞上清 | 1000 g离心5分钟去除杂质。 |

| 组织样本 | 按1:5-1:10加入PBS匀浆，离心取上清液测定。 |

标准曲线范围

检测范围：15.63~1000 pg/mL（典型梯度：1000/500/250/125/62.5/31.25/15.63 pg/mL）

灵敏度：≤5 pg/mL（最低检测限）

特异性：不与ETEC毒素A亚单位或霍乱毒素交叉反应。

操作步骤

稀释标准品及样本：梯度稀释标准品，样本按1:100比例预稀释。

加样：100μL/孔，设双复孔（标准品/样本/空白对照），37℃孵育1小时。

洗板：缓冲液洗涤3次（自动或手动洗板机）。

加检测抗体：100μL/孔，37℃孵育1小时。

加酶结合物：100μL/孔，37℃避光孵育30分钟。

显色/终止：TMB显色10分钟 → 终止液50μL/孔终止反应。

读数：450nm波长酶标仪测OD值（参考波长630nm）。

计算方式

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，OD值（减空白）为纵坐标。

根据样本OD值在曲线上插值得出LTB浓度。

重要公式：

最终浓度（pg/mL）= 插值结果 × 样本稀释倍数

注意事项

安全性：终止液含强酸，操作时穿戴防护装备。

稳定性：未使用试剂开盖后需密封保存，避免反复冻融。

精确性：加样误差需≤2%，洗涤彻底程度直接影响结果。

线性验证：若样本OD值超出标准曲线，应适当稀释后复测。

技术参数

| 指标 | 性能 |

| 批内变异系数（CV） | <8% |

| 批间变异系数（CV） | <12% |

| 回收率 | 85-115% |

| 适用仪器 | 主流酶标仪（如BioTek、Thermo Fisher等） |
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