核心用途

通过检测血清、血浆、细胞裂解液、组织匀浆等样本中的E3连接酶水平，研究其在蛋白质降解、细胞周期调控、信号转导、肿瘤发生、神经退行性疾病等生理或病理过程中的作用。

检测原理

捕获抗体包被：微孔板预先包被抗人E3连接酶的特异性单克隆抗体。

样本结合：加入待检测样本或标准品，样本中的E3连接酶与捕获抗体特异性结合。

检测抗体孵育：加入生物素化或酶标记的E3连接酶检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”夹心复合物。

显色反应：若为生物素化检测抗体，需再加入链霉亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）复合物，最终HRP催化底物（如TMB）显色。

结果计算：酶标仪测定450nm处吸光度（OD值），根据标准曲线计算样本中E3连接酶的浓度。

关键参数

样本类型 血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆等

灵敏度 最低检测限通常为 0.1–1 ng/mL

检测范围 常见 0.312–20 ng/mL 或 1–100 ng/mL（需匹配样本中目标蛋白浓度范围）

特异性 需确认是否与其他泛素相关酶（如E1、E2）或同源蛋白有交叉反应

规格 48T/96T

保存条件 通常2–8℃冷藏（未开封），部分试剂需-20℃冷冻保存，避免反复冻融

实验注意事项

样本处理：细胞裂解需用专用裂解液（含蛋白酶抑制剂），组织匀浆需充分研磨；

操作时间：严格控制孵育温度和时间（如37℃ 60分钟），避免影响结合效率；

洗涤步骤：洗板时确保每孔洗涤充分，避免残留液体导致背景值升高；

标准曲线：建议做复孔（3次重复），确保R²值≥0.98以保证结果可靠性。

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