预期用途

本试剂盒采用酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测人血清、血浆或其他生物液体中的非神经元性烯醇化酶（NNE）含量，适用于科研实验，不可用于临床诊断。

实验原理

固相包被：微孔板预包被纯化抗NNE抗体。

反应步骤：依次加入样本/标准品、生物素化抗NNE抗体、HRP标记亲和素，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色与检测：TMB底物在过氧化物酶催化下显蓝色，酸化后转为黄色，颜色深度与NNE浓度正相关。通过450nm波长测定OD值，计算浓度。

试剂盒组成

96孔酶联板：1块（预包被抗体）。

标准品（冻干粉）：2瓶（10 ng/ml，需用样品稀释液复溶，梯度稀释范围为0.156–10 ng/ml）。

检测溶液A/B、TMB显色液、终止液、洗涤缓冲液（浓缩液需稀释）。

封板膜、说明书及质检报告。

操作步骤

标准品制备：复溶后梯度稀释，避免孔内直接稀释。

加样与孵育：

加入标准品/样本（100μL/孔），37℃孵育1小时。

洗涤后加检测溶液A（100μL/孔），37℃孵育1小时。

重复洗涤，加检测溶液B（100μL/孔），37℃孵育30分钟。

显色与终止：

加TMB显色液（90μL/孔），避光反应15–30分钟。

加终止液（50μL/孔），立即测定OD值。

注意事项

样本处理：避免反复冻融，新鲜样本需离心去除沉淀，分装保存（-20℃）。

实验控制：标准品与样本需做双复孔，显色过浅可延长底物孵育时间。

板条保存：未用完板条需密封干燥保存，避免受潮。

干扰因素：细菌污染可能导致假阳性，溶血或脂血样本需预处理。

技术参数

检测范围：0.156–10 ng/ml（灵敏度0.078 ng/ml）。

精密度：板内变异系数＜10%，板间＜15%。

特异性：不与神经元烯醇化酶（NSE）等交叉反应。

保存条件：2–8℃冷藏，有效期6个月。

实验时长

双抗体夹心法：约4–4.5小时。

竞争法：约2–2.5小时。

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