人成熟促进因子(MPF)ELISA试剂盒

检测目标： CDK1/Cyclin B复合体活性（磷酸化p34cdc2）

适用样本： 血清、血浆、细胞裂解液、组织匀浆液

检测原理： 双抗体夹心法（Sandwich ELISA）

试剂盒组成

| 组分 | 规格 | 保存条件 |

| 预包被抗人CDK1抗体微孔板 | 8孔×12条 | 2–8°C干燥 |

| MPF标准品 | 6管（冻干）| -20°C |

| 生物素化检测抗体 | 1.2 mL | -20°C避光 |

| HRP标记链霉亲和素 | 1.2 mL | 2–8°C避光 |

| 样品稀释液 | 20 mL | 2–8°C |

| 显色底物(TMB) | 11 mL | 2–8°C避光 |

| 终止液(2M H₂SO₄) | 10 mL | 2–8°C |

| 洗涤缓冲液(25×浓缩) | 30 mL | 2–8°C |

关键性能参数

| 参数 | 指标 |

| 检测范围 | 15.6–1000 pg/mL |

| 最低检测限(LoD) | ≤ 4.3 pg/mL |

| 板内变异系数(CV) | < 8% |

| 板间变异系数(CV) | < 10% |

| 回收率 | 85–115% |

| 交叉反应性 | 与人MPF结合特异>99%；<br>与CDK2/Cyclin E无交叉 |

实验操作流程

样本前处理

细胞裂解液：RIPA裂解后离心取上清（≥10⁶个细胞）

血清/血浆：离心去除沉淀，1：20稀释使用

组织样本：按100mg组织加1mL PBS匀浆

标准曲线制备（建议梯度）

| 标准点 | 浓度(pg/mL) |

| S1 | 1000 |

| S2 | 500 |

| S3 | 250 |

| S4 | 125 |

| S5 | 62.5 |

| S6 | 15.6 |

检测步骤

加样：标准品/样本100μL/孔，37°C孵育90min

洗板：PBST洗3次

加生物素化抗体：50μL/孔，37°C孵育60min

加酶结合物：100μL/孔，37°C避光30min

显色：加TMB 90μL/孔→室温避光15min

终止：加终止液50μL/孔

检测：450nm读数（参考波长630nm）

数据计算

使用四参数逻辑曲线(4-PL)拟合标准曲线

计算公式：

MPF浓度 = (样品OD值 - 空白OD) / 曲线斜率 × 稀释倍数

典型标准曲线图

（图示：450nm吸光度 vs 标准品浓度对数坐标）

预期结果： R² ≥ 0.990

注意事项

避免反复冻融试剂（标准品复溶后分装保存）

显色时间>20min可能导致本底过高

细胞样本需检测总蛋白浓度校正（建议BCA法）

阳性对照：推荐使用HeLa细胞同步化后G2/M期裂解液

应用领域

肿瘤细胞周期研究（如乳腺癌、肝癌）

化疗药物作用机制验证

生殖细胞成熟调控机制分析
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