人肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）。预包被抗人HCⅡ单克隆抗体，样本中的HCⅡ与固相抗体结合，再加入生物素标记的抗HCⅡ二抗，形成“抗体-抗原-二抗”复合物。最后通过辣根过氧化物酶（HRP）催化底物显色，颜色深浅与HCⅡ浓度成正比。

用途

定量检测人血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）或细胞培养液中 肝素辅因子Ⅱ（HCⅡ） 的浓度，用于血栓性疾病、肝病及遗传性HCⅡ缺乏症的辅助研究。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（96T） | 储存条件 |

| 预包被抗体微孔板 | 1块（12条×8孔） | 2–8℃ |

| HCⅡ标准品（冻干粉） | 6管（0、2.5、10、25、50、100 ng/mL） | -20℃ |

| 生物素标记抗HCⅡ抗体 | 0.6 mL | -20℃ |

| HRP标记链霉亲和素 | 1.2 mL | 2–8℃（避光）|

| 显色底物（TMB） | 10 mL | 2–8℃（避光）|

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10 mL | 2–8℃ |

| 20×洗涤缓冲液 | 30 mL | 2–8℃ |

| 样本稀释液 | 20 mL | 2–8℃ |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

样本要求

血清/血浆：采集后离心（2000 × g，15分钟），分装冻存于-80℃，避免反复冻融。

细胞培养液：离心去除沉淀，直接检测或暂存-20℃。

避免溶血、脂血或细菌污染。

操作步骤

试剂准备：

标准品复溶：加500 μL去离子水至冻干粉，静置10分钟后混匀。

洗涤液：20×缓冲液用双蒸水1:19稀释。

加样：

标准孔：依次加入0、2.5、10、25、50、100 ng/mL标准品各50 μL。

样本孔：加待测样本50 μL。

孵育：37℃孵育90分钟。

加生物素抗体：每孔加50 μL，37℃孵育60分钟。

加酶结合物：每孔加100 μL HRP-链霉亲和素，37℃避光孵育30分钟。

洗涤：每步孵育后用洗涤液洗板5次（300 μL/孔）。

显色：每孔加90 μL TMB，37℃避光反应15~20分钟（显蓝色）。

终止：每孔加50 μL终止液（变黄色）。

检测：酶标仪于450 nm波长读取OD值（建议在10分钟内完成）。

结果计算

计算标准孔OD值均值，绘制标准曲线（浓度对数 vs. OD值）。

根据样本OD值从标准曲线计算HCⅡ浓度。

单位：ng/mL。

参考范围

健康成人血清HCⅡ参考值：70–120 ng/mL（不同实验室应建立自身参考区间）。

技术参数

灵敏度：≤1.0 ng/mL

检测范围：2.5–100 ng/mL

精密度：批内变异系数（CV）< 10%，批间CV < 15%

特异性：不与HCⅠ、AT-III等类似因子交叉反应。

注意事项

试剂使用前平衡至室温（25℃）。

避免强光直射或接触氧化剂。

终止液为强酸，需防护措施。

仅供科研使用，不用于临床诊断。
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