检测原理

采用双抗体夹心法（双位点ELISA）：

包被：微孔板预包被人假定蛋白LOC433328特异性抗体。

结合：样本中的LOC433328蛋白与固相抗体结合，再加入酶标记检测抗体形成复合物。

显色：加入底物TMB，经辣根过氧化物酶（HRP）催化显色（蓝色→黄色），显色深度与蛋白浓度正相关。

试剂盒组成

（以96T为例）

组分 规格/数量 保存条件

预包被酶标板 12孔×8条 2-8℃

标准品（冻干粉） 200 ng/ml ×1瓶 -20℃

酶标检测抗体 6 mL 2-8℃

底物A/B 各6 mL 避光，2-8℃

20×洗涤缓冲液 20 mL 室温

终止液 6 mL 2-8℃

样本稀释液 12 mL 2-8℃

注：标准品需用稀释液复溶后梯度稀释（200→6.25 ng/ml），洗涤液使用前按1:20蒸馏水稀释。

样本处理要求

血清/血浆：采集后离心（1000×g, 10 min），分装保存于-20℃（≤1个月）或-70℃（≤6个月），避免反复冻融。

组织匀浆：按重量体积比加生理盐水匀浆，离心取上清。

细胞上清：去除颗粒物后直接检测。 流式细胞仪

操作步骤

加样：

标准品孔：加不同浓度标准品50 μL。

样本孔：加待测样本10 μL + 样本稀释液40 μL（稀释5倍）。

空白孔：仅加稀释液。

孵育：37℃避光温育60分钟，洗板5次（每孔注满洗涤液，静置1 min后拍干）。

加酶标抗体：每孔加HRP标记抗体100 μL，37℃孵育60分钟，洗板5次。

显色：每孔加底物A/B各50 μL，37℃避光反应15分钟。

终止与检测：加终止液50 μL，15分钟内测450 nm OD值。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（R²≥0.9900）。

样本浓度 = 曲线对应值 × 稀释倍数（通常为5）。

关键注意事项

质量控制：

板内/板间变异系数应<15%。

空白孔OD值≤0.1，否则洗涤不彻底。

操作规范：

避免底物接触金属器械，终止液需缓慢加入防气泡。

洗板后彻底拍干，防止残留液体影响显色。

试剂保存：

开封后酶标板用自封袋密封防潮，显色剂临用前配制。

适用范围：仅限科研，不可用于临床诊断。

公司正在出售的产品