检测类型

双抗体夹心法 ELISA（定量检测）

检测样本类型

人血清

人血浆（EDTA/肝素抗凝）

细胞培养上清液

组织匀浆液（需特殊前处理）

注：避免使用溶血、脂血或反复冻融样本。

检测范围

典型范围：0.156 - 10 ng/mL

最低检测限（灵敏度）：通常 ≤ 0.05 ng/mL

试剂盒组分（96孔板规格）

| 组分 | 规格 | 保存条件 |

| 预包被抗人ALK抗体微孔板 | 12条×8孔 | 2–8°C（干燥）|

| ALK标准品（冻干粉） | 2瓶 | -20°C |

| 生物素标记检测抗体 | 1支（120 μL） | -20°C（避光）|

| HRP标记链霉亲和素（SABC） | 1支（120 μL） | -20°C（避光）|

| 样本稀释液 | 1瓶（20 mL） | 2–8°C |

| 检测抗体稀释液 | 1瓶（6 mL） | 2–8°C |

| SABC稀释液 | 1瓶（6 mL） | 2–8°C |

| 洗涤液（20×浓缩液） | 1瓶（30 mL） | 2–8°C |

| TMB底物溶液 | 1瓶（10 mL） | 2–8°C（避光）|

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10 mL） | 室温 |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

储存条件

未开封试剂盒：-20°C（避免反复冻融），有效期≥12个月

解冻后组分：2–8°C保存，1个月内使用

预包被板：严格密封防潮，2–8°C保存

实验所需设备

ELISA酶标仪（450nm检测波长）

洗板机或手动洗瓶

37°C恒温孵育箱

精密移液器及吸头

漩涡混合器

去离子水

操作流程

标准品/样本制备：复溶标准品，梯度稀释；样本按1:10~1:100稀释

加样：100μL/孔标准品或样本，37°C孵育90分钟

洗板：弃液，洗涤液洗3次

加检测抗体：100μL/孔生物素化抗体（1:100稀释），37°C孵育60分钟

洗板（同上）

加SABC：100μL/孔（1:100稀释），37°C孵育30分钟

洗板（同上）

显色：100μL/孔 TMB底物，37°C避光反应15分钟

终止：50μL/孔终止液，溶液变黄色

读数：5分钟内于450nm测OD值（参考630nm）

数据处理

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线

用四参数拟合（4PL）方程计算样本浓度

浓度单位：ng/mL（需乘以稀释倍数）

性能参数

精密度：板内CV < 8%，板间CV < 10%

回收率：85%~115%（血清/血浆验证）

特异性：与ALK融合蛋白、人Trk家族无交叉反应

稳定性：开板后15天内结果稳定

注意事项

严格遵守温育时间和温度

洗涤步骤需彻底，避免气泡残留

TMB显色后及时终止

不同批次试剂勿混用

临床诊断需经本地验证

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