预期用途

本试剂盒采用酶联免疫吸附法（ELISA），用于定量检测人血清、血浆、细胞培养上清或其他生物液体中的碱性磷酸酶（ALP）含量，适用于科研及临床体外检测。

实验原理

采用双抗体一步夹心法：

微孔板预包被抗ALP抗体，形成固相载体。

依次加入待测样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经温育后洗涤。

加入底物TMB显色，在过氧化物酶催化下生成蓝色产物，酸化后转为黄色。

颜色深度与ALP浓度呈正相关，通过酶标仪测定450 nm波长下的吸光度（OD值），计算浓度。

试剂盒组成

酶联板：96孔（可拆卸）

标准品：冻干粉2瓶，复溶后浓度为200 U/L，需梯度稀释（200 U/L至3.12 U/L），临用前配制。

样品稀释液：用于标准品及样本稀释。

检测抗体：HRP标记的抗ALP抗体。

TMB显色液、终止液、洗涤缓冲液等。

技术参数

检测范围：3.12–200 U/L（具体以产品手册为准）。

灵敏度：最低检测限＜3.12 U/L。

准确性：标准品线性回归R²≥0.990。

重复性：板内、板间变异系数（CV）均＜15%。

特异性：不与类似结构物质交叉反应。

样本要求

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞上清液等。

储存：2–8℃短期保存，长期需-20℃冻存，避免反复冻融。

操作步骤

标准品制备：复溶后梯度稀释。

加样：每孔加入样本或标准品50 μL，随后加入检测抗体50 μL，37℃孵育60分钟。

洗涤：洗板5次，拍干。

显色：每孔加TMB 100 μL，避光反应15分钟。

终止：加入终止液50 μL，15分钟内测定OD值。

注意事项

试剂盒需2–8℃避光保存，有效期6个月。

避免反复冻融标准品及样本。

不同批次试剂不可混用。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度。

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