人高敏甲状腺素(u-T4)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被u-T4特异性抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，经温育洗涤后，加入底物TMB显色。在过氧化物酶催化下，TMB转化为蓝色终产物（酸性条件下变为黄色），其吸光度（OD值，450nm测定）与样本中u-T4浓度呈正相关。

样本要求

血清：

采集后室温静置2小时或4℃过夜，3000×g离心10分钟分离血清，避免溶血或脂血。

短期保存于-20℃，长期保存于-80℃，避免反复冻融。

血浆：

使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，采集后30分钟内3000×g离心15分钟取上清。

其他样本：

细胞上清液或组织匀浆需3000×g离心10分钟去除颗粒物。

试剂盒组成

| 组分 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |

| 微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×4条 | 预包被抗体 |

| u-T4标准品 | 0.3mL×6管 | 0.3mL×6管 | 浓度梯度递增 |

| HRP标记检测抗体 | 10mL | 5mL | 即用型 |

| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 需按比例稀释 |

| 底物A/B | 各6mL | 各3mL | TMB显色系统 |

| 终止液 | 6mL | 3mL | 2M硫酸溶液 |

操作步骤

试剂准备：

使用前将所有组分平衡至室温（20-25℃），洗涤液按1:20稀释。

加样与温育：

每孔依次加入标准品或样本50μL，随后加入HRP标记抗体50μL，37℃避光孵育60分钟。

洗涤：

弃去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次。

显色与终止：

加入底物A/B各50μL，37℃避光反应15分钟，后加终止液50μL。

检测：

450nm波长下读取OD值，根据标准曲线计算样本浓度（最终浓度需乘以稀释倍数）。

注意事项

试剂盒需2-8℃保存，避免冷冻或强光照射。

不同批次组分不可混用，开封后未使用的板条需密封干燥保存。

若样本浓度超出标准曲线范围，建议适当稀释后重新检测。

操作时需佩戴防护用具，避免接触终止液等腐蚀性试剂。
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