人谷胱甘肽S转移酶(GSTs)ELISA试剂盒

产品应用

本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆液或其他生物液体样本中的谷胱甘肽 S 转移酶 (GSTs) 含量。

主要用于实验室科学研究用途 (Research use only, RUO)。

不可用于临床诊断、疾病筛查、法医学用途或药物疗效评估。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心法原理定量检测人样品中的谷胱甘肽 S 转移酶 (GSTs)。预先包被在微孔板上的抗人 GSTs 单克隆/多克隆抗体能特异性结合样品中的 GSTs。加入生物素标记的另一种抗人 GSTs 抗体，形成“抗体-抗原-生物素标记抗体”复合物。然后加入辣根过氧化物酶 (HRP) 标记的链霉亲和素 (Streptavidin-HRP)，其能特异性结合生物素。加入 TMB 底物显色，HRP 催化 TMB 产生蓝色产物。加入终止液终止反应后，颜色由蓝变黄。在 450 nm 波长下测定吸光度值 (OD值)，OD 值与样品中 GSTs 浓度成正比。通过标准曲线即可计算出样品中 GSTs 的含量。

样品收集与处理

血清： 使用含分离胶的采血管或真空促凝管采集全血。室温静置 30 分钟使其充分凝固。4°C 条件下，1500 × g 离心 15 分钟。小心收集上层澄清血清，避免吸入红细胞或凝块。立即检测或分装后于 -20°C 或 -80°C 冻存（避免反复冻融）。

血浆： 使用肝素、EDTA 或柠檬酸盐作为抗凝剂采血。4°C 条件下，1500 × g 离心 15 分钟（对于某些易沉淀物需更高速离心）。小心收集上层澄清血浆。立即检测或分装后于 -20°C 或 -80°C 冻存（避免反复冻融）。注意： 不同抗凝剂可能影响结果，需记录。避免使用溶血样本。

细胞培养上清： 收集细胞培养液到无菌离心管中。4°C 条件下，1500 × g 离心 10 分钟。收集澄清的上清液。立即检测或分装后于 -20°C 或 -80°C 冻存（避免反复冻融）。检测时可能需要适当稀释。

组织匀浆液： 取适量新鲜或冻存的组织（如肝组织）。在预冷的 PBS (0.01 M, pH 7.4) 或其他合适缓冲液中清洗，去除血迹。称重后剪碎。加入重量体积比约 9 倍（如 1g 组织加 9 mL）预冷的 PBS 或组织裂解液（含蛋白酶抑制剂）。在冰浴中用匀浆器研磨。收集匀浆液于 4°C，>10,000 × g 离心 20 分钟。收集澄清的上清液进行检测（通常需要稀释，具体浓度根据预实验确定）。立即检测或分装后于 -20°C 或 -80°C 冻存（避免反复冻融）。

注意：

避免反复冻融！ 反复冻融会显著降低被分析物活性/浓度。

样品中如果存在颗粒物或沉淀，检测前需再次充分混匀并离心去除。

检测前确保所有试剂盒组分和待测样本恢复至室温（约 20-25°C）。解冻过程在 4°C 冷藏过夜或冰上缓慢解冻为好。

建议： 初次检测未知浓度样品时，进行预实验确定**稀释倍数（例如在稀释液中 1:5, 1:10, 1:50, 1:100 稀释），确保其 OD 值在标准曲线范围内。

操作步骤

准备：

将所需试剂（洗涤缓冲液浓缩液除外）提前从冰箱取出，平衡至室温 (20-25°C) 约 20-30 分钟。

用去离子水将 洗涤缓冲液浓缩液 按说明书要求比例稀释 (例如 1:25) 成工作浓度。混匀后备用。

按照说明书要求，用 标准品/样品稀释液 复溶冻干标准品或梯度稀释液体标准品 (例如：配制 S0-S6 七个浓度点)。确保充分混匀。

按照说明书要求，用 检测抗体稀释液 稀释 生物素化抗人 GSTs 检测抗体。混匀。

按照说明书要求，用 酶结合物稀释液 稀释 链霉亲和素-HRP。混匀。避免强光照射。

显色底物 A 和 B 直接使用，避免强光照射。

终止液 直接使用。

加样：

取出所需数量的微孔板条固定在板架上（剩余的立即放回密封袋，加干燥剂密封保存）。

设置好 空白孔、标准品孔 (各浓度复孔)、待测样品孔 (建议复孔)。

空白孔： 加入 100 μL 标准品/样品稀释液。

标准品孔： 加入 100 μL 不同浓度的标准品溶液。

样品孔： 加入 100 μL 经过适当稀释的待测样品或稀释液对照 (稀释液选择及倍数根据说明书推荐或预实验结果)。

盖上封板膜，室温或 37°C 温育 [时间根据说明书，如 90分钟 或 120分钟]。

洗涤： 小心取下封板膜，甩去孔内液体。每孔加入配制好的洗涤缓冲液约 350 μL，静置 30 秒到 1 分钟，然后甩去液体。在吸水纸上拍干。重复此洗涤步骤 3-5 次。

加生物素化检测抗体：

每孔加入 100 μL 稀释好的生物素化抗人 GSTs 检测抗体溶液。

盖上新的封板膜，室温或 37°C 温育 [时间根据说明书，如 60分钟]。

洗涤： 同步骤 3，洗涤 3-5 次。

加酶结合物 (Streptavidin-HRP)：

每孔加入 100 μL 稀释好的链霉亲和素-HRP 溶液。

盖上新的封板膜，室温避光或 37°C 避光温育 [时间根据说明书，如 30分钟]。

洗涤： 同步骤 3，洗涤 3-5 次。最后一次洗涤后务必在吸水纸上用力拍干。

显色：

取等体积 显色底物 A 和 显色底物 B 在工作容器中混合，现混现用 (避免强光)。

每孔加入 100 μL 混合好的显色底物 (TMB) 溶液。

盖上封板膜，室温 避光 显色 [时间根据说明书，如 15-30分钟]。密切观察颜色变化（蓝色）。

终止反应：

每孔加入 50 μL 终止液。加入终止液时确保移液器吸头接触到液面（但避免产生气泡）。

轻轻晃动酶标板确保颜色混合均匀（蓝色立即变为黄色）。

终止反应后 5 分钟 内，在酶标仪上读取结果。

读数：

将酶标仪双波长调至 450 nm 作为主波长，建议使用 570 nm 或 630 nm 作为参考波长（用以消除孔底杂质或气泡干扰）。若仪器无自动调零功能，请确保先在空白孔设置零点/空白对照。

读取所有标准品孔和样品孔的吸光度值 (OD)。
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