毕赤酵母表达系统中常用的表达载体包括分泌表达载体和非分泌型表达载体。因此可以根据基因表达的目的选择合适的酵母表达载体。分泌型表达载体主要有pPIC9,pPIC9k,pHIL-S1,pPICZa,pYAM75P6;胞内表达的载体主要有:pHIL- D2,pA0815,pPIC3K,pPICZ,pHWO10,pGAPZ, pGAPZa等。
本次主要介绍一下pGAPZA、pGAPZαA和pPIC3.5K这三个载体。
| pGAPZA | pGAPZαA | pPIC3.5K |
启动子 | GAP | GAP | AOX1 |
抗性 | Zeocin | Zeocin | Kan/Amp |
载体标记 | C-Myc, C-His | C-Myc, C-His | HIS4 |
载体大小 | 2884bp | 3147bp | 9004bp |
信号肽 | 无 | α-factor secretion signal | 无 |
碳源 | 甘油或葡萄糖/无毒 | 甘油或葡萄糖/无毒 | 甲醇/有毒 |
受体菌株 | GS115 | GS115、SMD1168、X-33 | KM71、SMD1168、GS115 |
应用 | 常用于生产胞内蛋白的毕赤酵母表达载体 | 常用于生产分泌蛋白的毕赤酵母表达载体 | 常用于生产胞内蛋白的毕赤酵母表达载体 |
备注 | 穿梭型表达载体,能够在大肠杆菌和酵母中进行遗传复制。是以毕赤酵母中磷酸甘油酸脱氢酶 (GAP)基因启动子是组成型表达的,不存在诱导的问题,可以在以葡萄糖为碳源的培养基上表达。 | 穿梭型表达载体,能够在大肠杆菌和酵母中进行遗传复制。是以毕赤酵母中磷酸甘油酸脱氢酶 (GAP)基因启动子是组成型表达的,不存在诱导的问题,可以在以葡萄糖为碳源的培养基上表达。 | 插入基因是必需包含起始密码子ATG |
载体图谱:
pGAPZA载体图谱:
pGAPZαA载体图谱:
pPIC3.5K载体图谱: