基本信息

产品描述

LY411575是一种有效的γ-secretase抑制剂，在表达APP或NΔE的HEK293细胞中IC50为0.078 nM/0.082 nM(基于膜/细胞)，也抑制Notch分裂，IC50为0.39 nM。

靶点（IC50 & Targe）

Notch S3 cleavage,0.39nM

γ secretase (cell-based),0.082nM

γ secretase (membrane-based),0.078nM

体外研究

LY-411575抑制γ-分泌，其能够通过底物淀粉样前体蛋白(APP)和Notch S3裂解评估。[1]在原代和永生KS细胞中，LY-411575阻断Notch活化，导致细胞凋亡。[2]

体内研究

10 mg/kg口服剂量的LY-411575剂量依赖性降低大脑和血浆Aβ40与Aβ42。[1]在年轻(preplaque)的转基因CRND8小鼠体内，LY-411575降低皮质层Aβ40(ED50 ≈ 0.6 mg/kg)，并且在较高剂量下(>3 mg/kg)，产生显著的胸腺萎缩和肠道杯状细胞增生。在年轻和老年CRND8小鼠体内，口服和皮下注射给药，治疗窗是相似的。胸腺和肠道的副作用在2周清除期后是可逆的。1 mg/kg LY411575治疗3周，降低69%的皮层Aβ40，而不诱导肠道作用，尽管会观察到先前未报到的毛色变化。[3]

激酶实验

对Aβ和 NICD的测定:

测量细胞膜中γ-分泌酶活性的程序如前所述(Zhang L et al Biochemistry 40, 5049-5055)，细胞膜从表达APP的HEK293细胞中制备。表达APP或NΔE的完整HEK293细胞用不同浓度的LY- 411,575在37 °C下处理4小时。对于表达NΔE的细胞，将细胞裂解，细胞裂解物在4-12% NuPAGE凝胶上分离，加工的NICD片段通过蛋白质印记与裂解位点特定抗体进行检测。NICD产生的抑制通过点样密度计分析使用FluorChem定量。对于表达APP的细胞，收集条件培养基，在10,000×g下离心5分钟以除去细胞碎片，测定Aβ水平前储存在-20 °C。HEK293细胞膜和细胞试验中产生的Aβ40和Aβ42，以及来自TgCRND8小鼠的血浆Aβ40 和皮层Aβ40，不预处理，使用基于电化学发光检测的免疫测定进行分析。血浆Aβ42通过酶联免疫吸附法测定。市售的酶联免疫吸附试验试剂盒根据制造商说明用于测量皮层Aβ42。

细胞实验

Cell lines: 原代且永生的KS细胞

Concentrations: 500 μM

Incubation Time: 24小时

Method: DNA/PI着色使用标准方法进行。简而言之，在15% FBS 存在下，1×106细胞用100%乙醇渗透。将细胞洗涤，然后在37 °C下用10 mg/mL RNAse处理15分钟。加入PI (5 mg/mL)，细胞在4 °C下培育1小时，然后通过流式细胞术分析，每个门控分析10000个细胞。结果使用Immunotech Annexin V着色试剂盒根据制造商的说明进行确认。至少进行的三个独立试验表现出类似的结果。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: TgCRND8小鼠模型

Formulation: LY-411575以10 mg/mL的溶液在50%聚乙二醇，30%丙二醇，形成10%乙醇中形成，并在0.4%甲基纤维素张稀释后给药。

Dosages: 1-10 mg/kg

Administration: 口服

(Only for Reference)

参考文献

[1] Wong GT, et al, J Biol Chem, 2004, 279(13), 12876-12882.

[2] Curry CL, et al, Oncogene, 2005, 24(42), 6333-6344.

[2] Hyde LA, et al, J Pharmacol Exp Ther, 2006, 319(3), 1133-1

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