AT 406

基本信息

产品描述

AT-406是一种有效的，拟Smac的IAP(通过E3泛素连接酶起作用的凋亡蛋白抑制剂)拮抗剂，与XIAP-BIR3， cIAP1-BIR3和cIAP2-BIR3结合，Ki为66.4 nM， 1.9 nM和5.1 nM，比作用于Smac AVPI肽亲和力高50到100倍。Phase 1。

靶点（IC50 & Targe）

cIAP1-BIR3,1.9nM(Ki)

cIAP2-BIR3,5.1nM(Ki)

XIAP-BIR3,66.4nM(Ki)

体外研究

T-406是一种Smac模拟物，在氢键结合以及与XIAP的疏水性相互作用中，似乎能够很接近地模拟AVPI多肽，伴随额外的与XIAP的W323疏水性接触。AT-406对这些IAPs比对Smac AVPI多肽更敏感，具有50-100倍的结合亲和力。AT-406 (1 μM)完全恢复caspase-9的活性，其在无细胞体系中被500 nM XIAP BIR3抑制。在MDA-MB-231细胞中，AT-406诱导快速的细胞cIAP1降解，并摧毁细胞XIAP蛋白。AT-406有效抑制大量人癌症细胞系，在MDA-MB-231细胞和SK-OV-3卵巢癌细胞中，IC50分别为144和142 nM，对正常人乳腺样上皮MCF-12F细胞和初级人正常前列腺上皮细胞具有低毒性。在MDA-MB-231细胞中，AT-406通过诱导caspase-3活化和PARP裂解，诱导细胞凋亡。[1]

体内研究

AT-406在小鼠，大鼠，非灵长类动物，和狗体内具有良好的药代动力学(PK)性能和口服生物利用度。在MDA-MB-231异种移植物中，AT-406有效诱导肿瘤组织中cIAP1降解和半胱天冬酶-8的加工，以及PARP的裂解，在100 mg/kg，甚至200 mg/kg剂量下具有良好的耐受性。AT-406诱导显著的肿瘤生长抑制，100 mg/kg下P为0.0012。[1]

激酶实验

XIAP，cIAP1，和 cIAP2 BIR3 蛋白质的荧光偏振试验:

FL-AT-406(荧光标记的AT-406)用于开发一组新的FP试验，用于测定Smac模拟物对XIAP，cIAP-1，和cIAP-2 BIR3蛋白质的结合亲和力。FL-AT-406对每种IAP蛋白质的Kd值通过滴定实验使用固定浓度的FL-AT-406和不同浓度直到饱和的蛋白质进行测定。荧光偏振值使用Infinite M-1000酶标仪在Microfluor296孔，黑色，圆底板中测量。对每个孔，加入FL-AT-406 (对XIAP BIR3，cIAP-1 BIR3，和cIAP-2 BIR3的实验分别为2，1，和1 nM)和不同浓度的蛋白质，在测定缓冲液(100 mM磷酸钾，pH 7.5，100 μg/mL牛γ-球蛋白，0.02%叠氮化钠，和4% DMSO)中终体积为125 μL。将板混合，并在室温下温和摇晃培育2-3小时。毫极化单元(mP)中的偏振值在485 nm激发波长和530 nm发射波长下测量。随后，平衡解离常数(Kd)使用Graphpad Prism 5.0软件，根据蛋白质浓度对剂量依赖性FP的增加通过S形曲线拟合进行计算。在XIAP3 BIR3的竞争性结合实验中，AT-406与20 nM XIAP BIR3蛋白质和2 nM FL-AT-406在试验缓冲液(100 mM磷酸钾，pH 7.5；100 μg/mL 牛γ-球蛋白；0.02% 叠氮化钠)中进行培育。在cIAP1 BIR3蛋白质竞争性结合实验中，使用3 nM蛋白质和1 nM FL-AT-406。对于cIAP2 BIR3竞争性结合实验，使用5 nM蛋白质和1 nM FL-AT-406。对每个竞争性结合实验，偏振值在培育2-3小时之后使用Infinite M-1000酶标仪测量。IC50值，50%结合示踪物被取代时的抑制剂浓度，根据绘图使用非线性最小二乘法分析计算。曲线拟合使用PRISM软件进行。计算AT-406的Ki值。

细胞实验

Cell lines: MDA-MB-231乳腺癌和 SK-OV-3 卵巢癌细胞系

Concentrations: ～ 1 μM

Incubation Time: 4天

Method:细胞以(3-4)×103细胞/孔的密度与AT-406接种在96孔平底细胞培养板，并培育4天。不同浓度AT-406处理后的细胞生长抑制率通过(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺苯基)-2H-四唑谷氨酸盐 (WST-8)分析测定。将WST-8加入每孔，终浓度为10%，然后板在37 °C下培育2-3小时。样品吸光度在450 nm下使用TECAN ULTRA阅读器测量。抑制50%细胞生长的AT-406浓度(IC50)通过比较未处理细胞和AT-406处理细胞的吸光度计算。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 负荷MDA-MB-231 异种移植瘤的严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠

Formulation: AT-406 的盐酸盐水溶液

Dosages: 10 mg/kg (i.v.)，10 mg/kg (p.o.)，30 mg/kg (p.o.) 和 100 mg/kg (p.o.)

Administration: 静脉注射(i.v.) 或 口服(p.o.)给药

(Only for Reference)

参考文献

[1] Cai Q, et al. J Med Chem, 2011, 54(8), 2714-2726.

安全信息

图形或危害标志
提示语	Danger
危险说明	H302 H410
防范说明	P264 P270 P273 P301+P312
UN号码	3077
危险分类	9
包装等级	III