N-己酸基-4H-1,2,4-三氮唑(1,5-a)二氮杂环-1,8-萘酰亚胺

产品名称：

1359819-97-8
ANNA
3,9-Dihydro-1,3-dioxopyrido[3,4,5-gh][1,2,4]triazolo[1,5-a]perimidine-2(1h)-hexanoic acid
N-己酸基-4H-1,2,4-三氮唑(1,5-a)二氮杂环-1,8-萘酰亚胺

产品介绍：

基本信息

分子式	C₂₀H₁₇N₅O₄
分子量	391.38
存储条件	Freezer -20℃

应用

ANNA是一个理想的比率型pH敏感探针，它的吸收和发射光谱在生理pH范围内（pH 6-8）随pH的改变发生可逆的变化（如图1），并且在酸性和碱性状态下都有很高的荧光量子产率，其pH响应不受偶联基团或材料影响（如图2）[1-2]。ANNA应用广泛，已成功用于固定细胞在不同pH环境中成像（如图3）；活细胞内pH和肿瘤微环境体内外pH的监测。

图2 ANNA探针的pH响应性不受偶联基团或材料影响

图3 ANNA成功用于固定细胞在不同pH环境中成像

特点和优势：

在生理pH范围内具有良好的响应；
高光稳定性和高荧光量子产率；
离子强度对荧光团不产生干扰, 可用于活细胞、组织和动物等复杂生物体系；
可方便地通过活性酯法偶联其他基团，且pH响应功能不受影响。

产品使用说明

细胞置于直径为20mm的玻璃基底细胞培养皿（MatTek Co.）中培养24h；
pH探针ANNA（4 M）与细胞在细胞培养基中孵育1-2h；
用PBS缓冲液（pH=7.4）清洗细胞3次，去除游离的探针；
细胞成像：用100倍共聚焦显微镜观察。激发波长是405nm和488nm，荧光信号收集1通道425-475 nm和2通道500-600 nm的荧光强度^[注1];
制作pH标准曲线：用1mL含5 ug/mL nigericin^[注2]的不同pH的高钾离子HEPES缓冲液^[注3]处理细胞10min；进行细胞成像，根据I2通道/I1通道与pH的关系绘制曲线；
将待测样品比值带入标准曲线，获得实际细胞内外的pH。

注：
1：如配有455nm激光器：可直接用455nm激发，收集1通道（470nm-500nm）和2通道（505nm-540nm）荧光强度。
2：一种运载钾离子和氢离子的载体，能够使细胞内外的pH快速地达到一致。
3：高钾离子HEPES缓冲液含有125 mM KCl, 20 mM NaCl, 0.5 mM CaCl₂, 0.5 mM MgCl₂, 5 mM 葡萄糖和20 mM HEPES。

参考文献

其他说明

刘祥军副研究员科研成果 | pH敏感比率型荧光探针ANNA—生理pH范围内高效响应
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 刘祥军副研究员科研成果 | 荧光探针HQO—准确示踪线粒体自噬