基本信息
分子式 | C10H6N2O2 |
分子量 | 186.16 |
MDL编码 | MFCD00133899 |
存储条件 | Freezer -20℃ |
产品描述
AG-18抑制EGFR,IC50为35 μM。
靶点(IC50 & Targe)
EGFR,35μM
体外研究
AG 18抑制EGFR和IR,Ki分别为11 μM 和 12 mM。AG 18作用于A431 细胞,抑制EGF诱导的EGFR自磷酸化,IC50为15 μM。[1]AG 18 (10 μM)抑制EGF诱导的GH3细胞增殖。AG 18(10 μM)现在抑制10 nM 和 1 μM Ghrelin诱导的细胞增殖。AG 18(10 μM) 作用于GH3细胞,抑制Ghrelin刺激的ERK1/2磷酸化增加。[2]AG18作用于原代培养的星形胶质细胞,抑制体积敏感的[3H]牛磺酸释放,这种作用存在剂量依赖性。AG18激活肿胀引起的体积依赖性的D-[3H]天冬氨酸从原代星形胶质细胞培养物中释放。[3]AG 18(300 μM)作用于A549上皮细胞,抑制TPA诱导的ICAM-1表达刺激,这种作用存在剂量依赖性。AG 18(300 μM)作用于A549 上皮 细胞,也抑制TPA刺激的NF-kappaB DNA-蛋白结合和ICAM-1 启动子活性。AG 18(100 μM)作用于A549上皮细胞,抑制TNF-alpha和TPA刺激的IKK活性。[4]AG 18(10 μM)作用于颈动脉,降低4倍5-HT的效力,且降低对5-HT的最大收缩。AG 18(10 μM)转移2倍KCl诱导的收缩,且产生最大显著抑制作用。[5]
激酶实验
EGF受体自磷酸化检测:
来自A431细胞的WGA纯化的EGF受体(每组实验0.5 μg) 使用EGF(800 nM)在4°C下激活20分钟。加入Mg(Ac)2 (60 mM), Tris-Mes buffer, pH 7.6 (50 mM), 和[32P]ATP (20 pM, 每组实验5 μCi/)开始反应。在4°C或15°C下进行反应,加入SDS样品缓冲液(10% 甘油, 50 mM Tris, pH 6.8, 5% β-巯基乙醇, 和 3% SDS)终止反应。样品在8% SDS聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE) (从30%丙烯酰胺和0.8%双-(丙烯酰胺)中制得,含有0.375 M Tris, pH 8.8, 0.1% SDS, 0.05% TEMED,和0.46% 过硫酸铵)上跑胶。烘干凝胶,使用Agfa Curix RP2 X-射线胶片进行放射自显影。有关的放射性带被切断,并按Cerenkov模式计数。自磷酸化的快速阶段又持续了10分钟。在15°C下第一个10秒完成的磷酸化的程度包括总的自磷酸化信号的三分之一,可能反映了受体第一部位的磷酸化。因此,10秒间隔被选择用于随后的自磷酸化实验。
细胞实验
Cell lines: GH3细胞
Concentrations: 10 μM
Incubation Time: 0.5 小时
Method: GH3细胞按每孔5×104个细胞接种在含2%活性炭处理的FCS,和各种浓度的Ghrelin,和PMA或EGF的培养基中72小时,然后每孔加入2 μCi [3H]胸甘再进行6小时。按24小时,48小时和72小时的时间过程进行,用于Ghrelin刺激,选择72小时用于进一步的实验。研究也用于调查大鼠Ghrelin 或 Desoctanoyl-Ghrelin诱导的细胞增殖的影响,及U0126, GF109203X, AG 18, Wortmannin 和 H-89对Ghrelin诱导的MAPK刺激的影响。加入10 μM AG 18 30分钟后,进行处理。收集细胞,使用Microbeta 1450计数器,在闪烁液存在下,进行计数。实验至少重复3次。
(Only for Reference)
参考文献
[1] Gazit A, et al. J Med Chem, 1989, 32(10), 2344-2352.
[2] Nanzer AM, et al. Eur J Endocrinol, 2004, 151(2), 233-240.
[3] Mongin AA, et al. Am J Physiol, 1999, 276(5 Pt 1), C1226-1230.
[4] Chen C, et al. Cell Signal, 2001, 13(8), 543-553.
安全信息
图形或危害标志 | |
提示语 | Warning |
危险说明 | H302 H410 |
防范说明 | P264 P270 P273 P301+P312 P330 P391 P501 |
UN号码 | 3077 |
危险分类 | 9 |
包装等级 | III |
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