测定原理:
THL 催化海藻糖产生葡萄糖,经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢,过氧化物酶催化过氧化氢跟 4-氨基安替比林偶联酚反应生成显色物,在 505nm 处测定其吸光度值,反映 THL 的酶活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制(50T/24 样):
提取液:液体25ml×1瓶,4°C保存;
试剂一:液体10ml×1瓶,4°C保存;
试剂二:液体25ml×1瓶,4°C保存;
试剂三:液体25ml×1瓶,4°C保存。如果出现结冰现象可以37温浴溶解后使用。
工作液:试剂二和试剂三等比例混合,需要多少配多少,现配现用。