测定原理
TPX催化H2O2氧化二硫苏糖醇(DTT),H2O2的吸收波长为240nm,通过测定240nm吸光度的下降速率,通过对照减去过氧化氢酶(CAT)催化分解的H2O2,即可计算出TPX活性。因此,本试剂盒可以同时测定样品TPX和CAT活性。
自备仪器用品
低温离心机、紫外分光光度计、水浴锅、1ml石英比色皿、可调节移液枪、蒸馏水
试剂组成和配制
试剂一 液体×1 瓶,室温保存;
试剂二 液体×1 瓶,-20°C保存;
试剂三 液体×1 支,4°C保存。
粗酶液提取
粗酶液提取详见说明书。测定组织和细胞同时需要测定蛋白浓度。
TPX测定步骤
1、分光光度计预热30min 以上,调节波长到240nm,用蒸馏水调零;
2、试剂一和试剂二置于37°C(哺乳动物)或25°C(其它物种)预热30min 以上;
3、CAT活性测定管:取1ml石英比色皿,加入20μl上清液,900μl试剂一,80μl试剂三,迅速混匀后与240nm测定10s和130s吸光度,分别为A1和A2,计算ΔACAT=A1-A2
4、总活性测定管:取1ml石英比色皿,加入20μl上清液,900μl试剂二,80μl试剂三,迅速混匀后与240nm测定10s和130s吸光度,分别为A3和A4。ΔA总=A3-A4
注:对大量样品,每个样品都需要单独测定其CAT活性。