尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP，EC 2.7.7.9)在自然界广泛分布。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖(UDPG)，UDPG是高等植物和动物中主要活化酶的形式，作为葡萄糖基供体参与糖原、蔗糖、纤维素等的合成代谢。

UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖，其在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，UGP活性可以用340nm的吸光值的变化来反应。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容：

溶液的配制：

1.试剂一：临用前加15mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存2周。

2.试剂二：临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后4℃保存，禁止反复冻融，4℃保存1周。

3.试剂三：临用前加1.4mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存2周。

4.试剂四：临用前每支加1mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存2周。

5.工作液的配制：将试剂一：试剂二：试剂三：试剂四：试剂五：试剂六按体积比=600：100：20：40：100：250混合，现用现配。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样品处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1：5～10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液)进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

2.细胞：按照细胞数量(104个)：提取液体积(mL)为500～1000：1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液)，冰浴超声破碎细胞(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min)；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3.血清等液体：直接检测。

测定操作

1.紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2.操作表：

三、UGP酶活计算

1.按照样本蛋白浓度计算酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

UGP(U/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹ ]÷(V样×Cpr)÷T=321.54×ΔA÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活单位定义：每克组织每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

UGP(U/g质量)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹ ]÷(W ×V样÷V样总)÷T=321.54×ΔA÷W

3.按照细胞数量计算酶活单位定义：每104个细胞每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

UGP(U/10⁴cell)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹ ]÷(500×V样÷V样总)÷T=0.643×ΔA

4.按照液体体积计算酶活单位定义：每毫升液体每分钟产生1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

UGP(U/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V反总×10⁹ ]÷V样÷T=321.54×ΔA

V反总：反应体系总体积，1×10^-3L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5min；Cpr：样本蛋白质浓度， mg/mL；W：样本质量，g ；500：细胞或细菌总数，500万；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

注意事项：

1.空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。

2.ΔA大于0.6或者A2测定大于1.2时，建议将样本稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时，可以延长反应时间(5min或10min)来测定。