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碱性木聚糖酶(BAX)活性检测试剂盒(微量法)
碱性木聚糖酶(BAX)活性检测试剂盒(微量法)图片
包装:100管/48样


产品介绍

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,碱性木聚糖酶(BAX)一般分离自最适生长pH为9-11的微生物。

BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。

产品内容:

缓冲液:液体60ml×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体7ml×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体10ml×1瓶,4℃避光保存。

标准品:粉剂×1支,4℃保存。10mg木糖。临用前加入667μL蒸馏水配制成100μmol/ml的木糖标准液。再稀释50倍即2μmol/ml的木糖标准溶液备用。

需自备的仪器和用品:

天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板和蒸馏水。

操作步骤:

一、粗酶液提取

1、发酵液:发酵液于8000rpm,4℃,离心15min,取上清,作为待测样品。

2、酶干粉:称约1mg,加1ml缓冲液溶解,8000rpm,4℃,离心15min,取上清蒸馏水稀释10倍待测。

3、组织样品:称约0.1g组织,加入1ml缓冲液,冰上充分研磨。8000rpm,4℃,离心15min,取上清蒸馏水稀释10倍待测。

二、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

2、样本测定(在EP管中加入下列试剂)

试剂名称(μL)对照管测定管空白管标准管
样品6060--
2μmoL/ml木糖标准品---60
蒸馏水--60-
缓冲液90909090
试剂一-606060

混匀,50℃水浴中反应30min,立即沸水浴中10min灭活。(注意不要让盖子爆开,以免进水,改

变了反应体系)



试剂一60---
试剂二90909090
混匀,沸水浴中显色5min(注意不要让盖子爆开,以免进水改变了反应体系),冷却后吸取200μL于96孔板或比色皿中,尽快测定各管540nm下的吸光度,分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。

三、BAX活性计算:

1、发酵液BAX活力计算:

酶活定义50℃,pH 9.0条件下,每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(U/ml)=C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷T=0.067×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)

C标准:木糖标准溶液浓度,2μmoL/ml;T:反应时间,30min。

2、酶干粉BAX活力计算:

酶活定义:50℃,pH 9.0条件下,每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(U/mg)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V提取÷W1÷T=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷W1

10:样本稀释倍数,10倍;C标准:木糖标准溶液浓度,2μmoL/ml;V提取:加入缓冲液体积,1ml;W1:酶干粉重量,mg;T:反应时间,30min。

3、组织中BAX活力计算:

酶活定义:50 ℃,pH 9.0条件下,每mg组织蛋白每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

ACX活力(U/mg prot)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V样品÷(V样品×Cpr)÷T=0.67×∆A测定÷∆A标准÷Cpr

(2)按样品鲜重计算:

酶活定义:50℃,pH 9.0条件下,每克组织每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(U/g鲜重)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V提取÷W2÷T=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷W2

10:样本稀释倍数,10倍;C标准:木糖标准溶液浓度,2μmoL/ml;V提取:加入缓冲液体积,1ml;W2:样本鲜重,g;T:反应时间,30min;Cpr:样品蛋白浓度,mg/ml;V样品:加入的样品体积,0.06ml。

注意事项:

1、吸光度变化应该控制在0.01~1.2之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

2、试剂盒2-8℃保存,保质期3个月,建议尽快使用。

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