碱性木聚糖酶(BAX)活性检测试剂盒(微量法)
产品介绍
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。 木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,碱性木聚糖酶(BAX)一般分离自最适生长pH为9-11的微生物。 BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。 产品内容: 缓冲液:液体60ml×1瓶,4℃保存。 试剂一:液体7ml×1瓶,4℃避光保存。 试剂二:液体10ml×1瓶,4℃避光保存。 标准品:粉剂×1支,4℃保存。10mg木糖。临用前加入667μL蒸馏水配制成100μmol/ml的木糖标准液。再稀释50倍即2μmol/ml的木糖标准溶液备用。 需自备的仪器和用品: 天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板和蒸馏水。 操作步骤: 一、粗酶液提取 1、发酵液:发酵液于8000rpm,4℃,离心15min,取上清,作为待测样品。 2、酶干粉:称约1mg,加1ml缓冲液溶解,8000rpm,4℃,离心15min,取上清蒸馏水稀释10倍待测。 3、组织样品:称约0.1g组织,加入1ml缓冲液,冰上充分研磨。8000rpm,4℃,离心15min,取上清蒸馏水稀释10倍待测。 二、测定步骤 1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。 2、样本测定(在EP管中加入下列试剂)
混匀,50℃水浴中反应30min,立即沸水浴中10min灭活。(注意不要让盖子爆开,以免进水,改
三、BAX活性计算: 1、发酵液BAX活力计算: 酶活定义50℃,pH 9.0条件下,每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。 BAX活力(U/ml)=C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷T=0.067×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白) C标准:木糖标准溶液浓度,2μmoL/ml;T:反应时间,30min。 2、酶干粉BAX活力计算: 酶活定义:50℃,pH 9.0条件下,每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。 BAX活力(U/mg)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V提取÷W1÷T=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷W1 10:样本稀释倍数,10倍;C标准:木糖标准溶液浓度,2μmoL/ml;V提取:加入缓冲液体积,1ml;W1:酶干粉重量,mg;T:反应时间,30min。 3、组织中BAX活力计算: 酶活定义:50 ℃,pH 9.0条件下,每mg组织蛋白每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。 ACX活力(U/mg prot)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V样品÷(V样品×Cpr)÷T=0.67×∆A测定÷∆A标准÷Cpr (2)按样品鲜重计算: 酶活定义:50℃,pH 9.0条件下,每克组织每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。 BAX活力(U/g鲜重)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V提取÷W2÷T=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷W2 10:样本稀释倍数,10倍;C标准:木糖标准溶液浓度,2μmoL/ml;V提取:加入缓冲液体积,1ml;W2:样本鲜重,g;T:反应时间,30min;Cpr:样品蛋白浓度,mg/ml;V样品:加入的样品体积,0.06ml。 注意事项: 1、吸光度变化应该控制在0.01~1.2之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。 2、试剂盒2-8℃保存,保质期3个月,建议尽快使用。 用户评论 产品评分 目前评分共0人 产品质量
售后服务
易用性
性价比
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