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土壤亮氨酸氨基肽酶(S-LAP)活性检测试剂盒(可见分光光度法)
土壤亮氨酸氨基肽酶(S-LAP)活性检测试剂盒(可见分光光度法)图片
包装:50管/24样


产品介绍

S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶,由土壤微生物分泌。S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切相关。

S-LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺,后者在405nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP活性。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成:

试剂名称规格保存条件
试剂一液体50ml×1瓶4℃
试剂二粉剂×1瓶4℃

溶液的配制:

1.试剂二:临用前加入5ml丙酮溶解。

需自备的仪器和用品:

天平、离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、研钵、甲苯、丙酮、30-50目筛、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

土样自然风干,过30-50目筛。

二、测定步骤

1.分光光度计预热30min以上,波长调至405nm,蒸馏水调零。

2.加样表:


测定管对照管
风干土样(g)0.10.1
甲苯(μL)5050
震荡混匀,室温静置15min。
试剂一(μL)850850
试剂二(μL)100-
30℃水浴反应1h后立刻煮沸5min。流水冷却至室温。
试剂二(μL)-100
14000g常温离心10min,取上清于405nm处测定吸光值,分别记为A测定管、A对照管,计算ΔA=A测定管-A对照管。

三、酶活计算公式

酶活性定义:每克土壤每分钟生成1nmol对硝基苯胺为一个酶活力单位。

S-LAP活性(U/g土样)=ΔA÷(ε×d) ×109×V反总÷W÷T=1.689×ΔA÷W

ε:对硝基苯胺摩尔消光系数:9.87×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,1ml=10-3L;W:土样质量,g;T:反应时间,60min;109:单位换算系数,1mol=109nmol。

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