磷脂酶D(PLD)检测试剂盒(微量法)
产品介绍
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 磷脂酶 D(EC 3.1.4.4)即磷脂酰胆碱水解酶,是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称,广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中,具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。 磷脂酶 D催化水解磷脂酰胆碱末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和胆碱,胆碱在胆碱氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢,过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将 4-氨基安替比林和重蒸酚氧化成粉红色物质,在 500nm处有特征吸收峰。 产品内容:
溶液的配制: 1.试剂三:临用前加 1ml无水乙醇充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。 需自备的仪器和用品: 天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅、无水乙醇。 操作步骤: 一、酶液提取 1.组织:按照质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g,加入 1ml提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,10000g离心 5min,取全部上清于 4℃、100000g离心 30min,弃上清,取沉淀溶于1ml试剂一。 2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为 500~1000:1的比例(建议 500万细胞加入 1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后于 4℃,10000g离心 5min,取全部上清于 4℃、100000g离心 30min,弃上清,取沉淀溶于 1ml试剂一。 3.血清:直接测定。 二、测定操作
三、酶活计算公式 a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1.按照蛋白浓度计算 酶活性定义:每毫克蛋白每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。 PLD活性(nmol/min/mg prot)=(A测定管÷A标准管)×C标准÷Cpr÷T=16.7×(A测定管÷A标准管)÷Cpr 2.按照样本质量计算 酶活性定义:每克组织每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。 PLD活性(nmol/min/g鲜重)=(A测定管÷A标准管)×C标准÷W÷T=16.7×(A测定管÷A标准管)÷W 3.按照细胞数量计算 酶活性定义:每104个细胞每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。 PLD活性(nmol/min/104cell)= (A测定管÷A标准管)×C标准÷细胞数量÷T=16.7×(A测定管÷A标准管)÷细胞数量 4.按照液体体积计算 酶活性定义:每毫升血清每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。 PLD活性(nmol/min/ml)=(A测定管÷A标准管)×C标准÷T=16.7×(A测定管÷A标准管) C标准:标准品浓度,500nmol/ml;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W:样本质量,g/ml;T:反应时间,30min。 b.用96孔板测定的计算公式如下 1.按照蛋白浓度计算 酶活性定义:每毫克蛋白每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。 PLD活性(nmol/min/mg prot)=(A测定管÷A标准管)×C标准÷Cpr÷T=16.7×(A测定管÷A标准管)÷Cpr 2.按照样本质量计算 酶活性定义:每克组织每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。 PLD活性(nmol/min/g鲜重)=(A测定管÷A标准管)×C标准÷W÷T=16.7×(A测定管÷A标准管)÷W 3.按照细胞数量计算 酶活性定义:每104个细胞每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。 PLD活性(nmol/min/104 cell)=(A测定管÷A标准管)×C标准÷细胞数量÷T=16.7×(A测定管÷A标准管)÷细胞数量 4.按照液体体积计算 酶活性定义:每毫升血清每分钟水解磷脂酰胆碱产生1nmol胆碱所需的酶量为一个酶活力单位。 PLD活性(nmol/min/ml)=(A测定管÷A标准管)×C标准÷T=16.7×(A测定管÷A标准管) C标准:标准品浓度,500nmol/ml;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W:样本质量,g/ml;T:反应时间,30min。 注意事项: 1.显色完成后,若有沉淀,于8000rpm,25℃离心5min后取上清测定。 2.吸光值不宜超过1,否则用试剂一将酶液进行稀释,并在计算公式中乘以稀释倍数。 用户评论 产品评分 目前评分共0人 产品质量
售后服务
易用性
性价比
|
同品牌产品:
相关产品:
|