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单胺氧化酶(MAO)检测试剂盒(醛苯腙微板法)
单胺氧化酶(MAO)检测试剂盒(醛苯腙微板法)图片
产品介绍

单胺氧化酶(Monoamine Oxidase,MAO)是一组催化多种单胺类化合物氧化脱氨的酶,属于细胞外酶,含有铜离子,分布于肝脏、肾脏等组织的线粒体内,其含量分布为肝脏>心脏>肾脏>脑>肺>骨骼肌,血小板、胎盘中也含有 MAO。线粒体中的 MAO与膜紧密结合,仅少量为可溶性的,存在于细胞质中,血液和结缔组织中的 MAO为水溶性。

单胺氧化酶 (MAO)检测试剂盒 (醛苯腙微板法 )其检测原理是待测样品在 MAO作用下,氧化底物苄胺生成苄醛,后者经催化反应生成醛苯腙呈棕红色,通过酶标仪检测 470nm处吸光度,根据标准曲线即可测出 MAO活力,100T试剂盒可检测样本数约为45个。该产品仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成:

试剂(A):苄醛标准(5mmol/L)1ml4℃避光
试剂(B): MAO Assay buffer30mlRT
试剂(C):苄胺缓冲液1ml4℃避光
试剂(D):苄醛显色液5ml4℃避光
试剂(E):苄醛显色缓冲液20mlRT
使用说明书1份

自备材料:

1、蒸馏水

2、离心管或小试管、精密天平

3、酶标仪、96孔板、恒温箱或水浴锅

操作步骤(仅供参考):

1、准备样品:

①血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-20℃冻存,用于 MAO的检测。

②细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行匀浆,低速离心取上清,-20℃冻存,用于 MAO的检测。

③高活性样品:如果样品中含有较高活性的 MAO,可以使用 MAO Assay buffer稀释。

2、稀释标准品:用 MAO Assay buffer稀释苄醛标准(5mmol/L)至 0.5mmol/L,即为苄醛标准工作液(0.5mmol/L),4℃保存备用,按下表制备标准曲线。

加入物(μl)123456
苄醛标准工作液(0.5mmol/L)0.81.63.26.49.612.8
MAO Assay buffer59.258.456.853.650.447.2
相当于苄醛(nmol/孔)0.40.81.63.24.86.4
相当于 MAO单位(nmol/h∙ml)12.52550100150200

3、 MAO加样:按照下表设置空白管、对照管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入(96孔板中),并注意避免产生气泡。如样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

加入物(μl)空白管标准管对照管测定管
待测样品(如血清等)1616
MAO Assay buffer4040
苄胺缓冲液4
混匀,37℃水浴 2h
MAO Assay buffer60
系列标准品(1~6号)60
苄醛显色液40404040
苄胺缓冲液4
混匀,37℃水浴 20min
苄醛显色缓冲液160160160160

4、MAO测定:混匀,96孔板中以蒸馏水调零,酶标仪 470nm处测定各孔吸光度(记为 A空白、A标准、A对照、A测定)。

计算: MAO活性单位的定义:在 37℃ 1ml血清中 MAO 1h催化底物产生 1nmol苄醛为一个 MAO酶活力单位,根据酶活性定义计算出样品中的 MAO活性。

以 60μl系列标准品(1~6号)所含苄醛 nmol数对应的 MAO活性单位(nmol/h∙ml)为横坐标,以(A标准-A空白)吸光度之差值为纵坐标,绘制标准曲线,用待测样品(A测定-A对照))吸光度之差值在标准曲线上查出待测样品的 MAO活性。当酶活力高于 200U/ml时,应将样品适当稀释后重新测定,结果乘以稀释倍数。

标准曲线制作中各管 MAO活性单位(U/ml或 nmol/h∙ml)

=苄醛 nmol数/(2×0.016)

=苄醛 nmol数×31.25

血清 MAO活力(U/ml或 nmol/h∙ml)

=苄醛 nmol数×N/(t×Vs)

=苄醛 nmol数×31.25×N

=标曲中查出的样品 MAO活性×N

组织 MAO活力(U/mg或 nmol/h∙mg)

=苄醛 nmol数×VT×N/(t×Vs×m)

=苄醛 nmol数×31.25×VT×N/m

=标曲中查出的样品 MAO活性×VT×N/m

式中:VT=待测样品总体积(ml)

N=待测样品检测前的稀释倍数

Vs=检测时所用样品体积(ml)=0.016

t=反应时间(h)=2

m=待测样品质量(mg)

注意事项:

1、胆红素浓度小于 257μmol/L,血红蛋白浓度小于 4g/L,对 MAO活力检测没有影响。

2、标准曲线制作中各管苄醛 nmol数乘以 31.25得 MAO活性单位数。

3、若将上述定义的酶活性单位更换为国际单位,应除以 60。

4、加入苄醛显色缓冲液后,应 1h内检测完毕。

5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:6个月有效。4℃运输,4℃保存。

附录:参考标准曲线范围:Leagene在室温条件下通过分光光度计 470nm测定 MAO活性标准在 0、12.5、25、50、100、150、200U/ml时的吸光度,并做出其标准曲线如下:

注意:由于检测仪器和操作手法等条件的不同,参考值范围会有不同,该值仅供参考,对于要求精确计算苄醛含量的,可以进行多点重复测定;根据 Leagene测定经验显示12.5U/ml以下、200U/ml以上标准曲线会有偏差。

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