Chk1 激酶在 ATM/ATR 激酶下游发挥作用并且在 DNA 损伤检查点控制、胚胎发育和肿瘤抑制中起着重要作用 (1)。Chk1 的激活需要在 Ser317 和 Ser345 位点由 ATM/ATR 引起的磷酸化，随后在Ser296 发生自磷酸化。该激活会出现以响应 DNA 复制受阻和某些形式的遗传毒性应激 (2)。在检查点激活后 Ser345 位点的磷酸化促使 Chk1 定位至胞核 (3)，而Ser317 位点的磷酸化以及 PTEN 的位点特异性磷酸化则使其在 DNA 复制停顿后可以再进入细胞周期 (4)。Chk1 对细胞周期发挥其检查点机制，在某种程度上是通过调控 cdc25 磷酸酶家族发挥的。cdc25A 的 Chk1 磷酸化导引其供蛋白酶解并且通过 14-3-3 结合作用抑制其活性 (5)。激活的 Chk1 可以通过 Ser216 位点的磷酸化使 cdc25C 失活，从而阻断激活 cdc2 及转变成有丝分裂 (6)。据已表明，中心体 Chk1 可使 cdc25B 磷酸化并抑制其激活 CDK1-细胞周期蛋白 B1，从而终止有丝分裂纺锤体的形成和染色质的凝缩 (7)。另外，Chk1 在纺锤体检查点功能中通过调控 aurora B 和 BubR1 而发挥作用 (8)。调查研究表明，Chk1 可作为癌症治疗的药物靶标，这是由于在许多癌细胞系中对 Chk1 的抑制会导致细胞死亡 (9)。
Chk2 是出芽酵母 Rad53 检查点激酶和裂殖酵母 Cds1 检查点激酶的哺乳动物同源物 (5-7) 。Chk2 氨基端结构域含有一系列的 7 个丝氨酸残基或苏氨酸残基 (Ser19、Thr26、Ser28、Ser33、Ser35、Ser50 和 Thr68) ，每个之后紧接着谷氨酰胺 (SQ 或 TQ 基序) 。这些残基被认为是 ATM/ATR 激酶的优选磷酸化位点 (8)。经过电离辐射 (IR) 、UV 辐射及羟基脲封闭 DNA 复制造成的 DNA 损伤之后，该区域中的 Thr68 及其他位点确实因 ATM/ATR (9-11) 而磷酸化。因此，SQ/TQ 簇集结构域似乎具有调控功能。Thr68 磷酸化是随后激活步骤的前提条件，其原因通常认为是 Chk2 在激酶域激活环中残基 Thr383 和 Thr387 处的自磷酸化 (12) 。