包装 | 价格(元) |
1000U | 电议 |
5000U | 电议 |
我们的产品Taq DNA聚合酶能够在适当缓冲体系中,基因特异性引物和dNTPs存在的情况下根据已解链的模板合成DNA。 它是从大肠杆菌中提取的重组产物,表达了thermu aquaticus DNA聚合酶基因。
Taq DNA聚合酶具有5'→3'DNA聚合酶和微弱的5'→3'核酸外切酶的能力,但没有3'→5'外切酶的能力,这意味着会在3'末端出现dA突出。 利用该特性,它可用于TA克隆。 在PCR反应中,Taq DNA聚合酶的延伸率约为1-2 kb / min,这取决于模板基因的复杂程度。对于大部分模板,您可以使用1 min/kb. 如果需要对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,可以使用我们的产品SYBR Safe DNA Gel Stain(Cat:A8743)加入胶中。
Components | 1000 U | 5000 U |
Taq DNA Polymerase | 200 μl | 1 ml |
10X PCR Buffer(Mg2+plus) | 2 × 1 ml | 10 × 1 ml |
将所有组分储存在-20°C。 |
可用于一般PCR,添加dA(腺嘌呤)突出或其他实验的理想产品
更低的单实验成本
常见问题 | 可能原因 | 解决方案 |
PCR产物没有或非常少 | ||
引物设计不佳 | 选择适当的引物设计软件进行引物设计 | |
待扩增片段GC含量偏高或片段长 | 推荐使用其它更适合的DNA聚合酶 | |
退火温度不佳;延伸时间太短;循环数太少 | 优化PCR实验条件 | |
模板浓度过低;实验样品 DNA损伤或降解 | 适当加大模板量;重新制备模板 | |
模板质量太差 | 用适当的DNA纯化方法例如柱纯化等纯化模板DNA | |
引物浓度过低;Mg2+浓度未优化 | 适当调整引物浓度及Mg2+浓度 | |
扩增特异性差,非特异性扩增 | ||
引物设计不完善 | 引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,可降低引物浓度,必要时重新设计引物 | |
模板质量太差 | 模板不纯,被污染,需重新制备模板; 模板降解或过量,通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新纯化模板 | |
PCR 循环条件未优化 | 如果出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度,降低循环数调整;如果出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、降低循环数 | |
空白对照出现扩增产物 | ||
引物设计不合理 | 扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列,重新设计引物 | |
携带污染 | 若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染;更换新的Mix、水或引物重复实验;反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染 | |
扩增的条带亮度不够 | ||
引物降解 | 检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解,必要可更换引物 | |
模板质量 | 首先确认模板的质量,长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;如果模板没有了,可用首次扩增产物按倍比稀释后作为模板进行二次扩增 | |
酶浓度 | 可适当提高酶的使用量 | |
PCR 循环条件未优化 | 可尝试使用Touch Down程序;延长延伸时间,提高循环数 |