描述
HyperScribe(TM) All in One mRNA Synthesis Kit Plus 1 (ARCA, 5mCTP, ψUTP, T7, poly(A))
试剂盒用于在体外快速合成ARCA加帽，5mCTP和 ψUTP修饰，poly（A）加尾的mRNA。通过使用T7 RNA聚合酶，Cap0类似物（ARCA，货号B8175）以共转录方式被掺入mRNA 5'端，形成Cap0结构。ARCA的添加保护mRNA免于降解并确保高翻译效率。修饰核苷酸5mCTP（货号B7967）和ψUTP（Pseudo-UTP，货号B7972）的添加可以减少宿主细胞的免疫反应。经过短暂的DNase I处理以去除模板DNA后，加帽和修饰的mRNA可以利用Poly（A）聚合酶在3'端进行加尾。聚腺苷酸化（即Poly（A）尾的添加）使mRNA更加稳定并提高mRNA的翻译起始效率。
该试剂盒有诸多应用，例如体外翻译、反义RNA和RNAi实验、RNA疫苗，RNA结构和功能研究，核酶生物化学，RNase蛋白质实验和基于探针的杂交印迹。
每次标准反应为20 μL，该试剂盒可进行25次反应。对于每次的标准反应，1 μg 的对照模板可产生25-180 μg 的RNA。
组份和存储
（1）mRNA的合成（ARCA加帽，5mCTP和 ψUTP修饰） |
| 组分 | 25 rxns |
| T7 RNA Polymerase Mix | 50 μL |
| 10X Reaction Buffer | 50 μL |
| ATP (20 mM) | 50 μL |
| UTP (20 mM) | 25 μL |
| CTP (20 mM) | 25 μL |
| GTP (20 mM) | 25 μL |
| ARCA (60 mM) | 35 μL |
| 5mCTP (10 mM) | 50 μL |
| Pseudo-UTP (10 mM) | 50 μL |
| Control Template (0.5 μg/μL) | 5 μL |
| RNase-free H2O | 0.5 mL |
所有的组分请在-20°C保存。 |
（2）mRNA的加尾 |
| 组分 | 25 rxns |
| E-PAP (2 units/μL) | 100 μL |
| 5X E-PAP Buffer | 600 μL |
| ATP Solution (100 mM) | 100 μL |
| 25 mM MnCl2 | 250 μL |
| Nuclease - free Water | 1 mL x 2 |
所有的组分请在-20°C保存。 |
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