体外激酶试验

0.14 μM纯化的无活性重组MEK-1蛋白与抑制剂在15μL激酶缓冲液(包含20 mM MOPS pH7.2，25 mM β-甘油磷酸，5 mM EGTA，1 mM 原矾酸钠，1 mM DTT，100 μM ATP，15 mM MgCl2)30℃条件下孵育10分钟后，将1 ng BRAF，CRAF或BRAF V600E共结合0.5 μg灭活的重组ERK2加入总体积为20 μL的反应体系中。30°C下培育30分钟后，加入Laemmle样品缓冲液结束反应。通过SDS-PAGE方法测定磷酸化-MEK的水平得知酶活性。利用SuperSignal West Pico化学发光底物显示免疫反应性蛋白。

细胞系

含KRAS突变的HCT116或SW620细胞

溶解方法

溶于DMSO。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37℃加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20℃可放置数月。

反应时间

0.01-0.15 μmol/L; 3h-48 h;

应用

使用GDC-0623处理HCT116细胞或含KRAS突变的HCT116细胞或SW620细胞，GDC-0623以剂量和时间依赖的方式上调凋亡前体蛋白BIM表达；GDC-0623抑制A375 (BRAFV600E)、HCT116 (KRASG13D)、COLO 205、HT-29和HCT116细胞增殖，其EC50值分别为4 nM、53 nM、11 nM、18 nM和94 nM。

动物模型

A375、MiaPaCa-2和 HCT116肿瘤细胞异种移植小鼠模型

剂量

40 mg/kg、口服给药、每日一次、持续20天

应用

GDC-0623抑制MiaPaCa-2和HCT116肿瘤的生长，抑制率分别为120%和115%。

注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。实际溶解度和理论值可能略有不同，这是由实验系统的误差引起的，属于正常现象。

References:

1. Hatzivassiliou, G., Haling, J. R., Chen, H., Song, K., Price, S., Heald, R., Hewitt, J. F., Zak, M., Peck, A., Orr, C., Merchant, M., Hoeflich, K. P., Chan, J., Luoh, S. M., Anderson, D. J., Ludlam, M. J., Wiesmann, C., Ultsch, M., Friedman, L. S., Malek, S. and Belvin, M. (2013) Mechanism of MEK inhibition determines efficacy in mutant KRAS- versus BRAF-driven cancers. Nature. 501, 232-236

2. Zaanan, A., Okamoto, K., Kawakami, H., Khazaie, K., Huang, S. and Sinicrope, F. A. (2015) The Mutant KRAS Gene Up-regulates BCL-XL Protein via STAT3 to Confer Apoptosis Resistance That Is Reversed by BIM Protein Induction and BCL-XL Antagonism. J Biol Chem. 290, 23838-23849