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NVP-BSK805
本产品不向个人销售,仅用作科学研究,不用于任何人体实验及非科研性质的动物实验。
NVP-BSK805图片
CAS NO:1092499-93-8
包装与价格:
包装价格(元)
10mM (in 1mL DMSO)电议
5mg电议
10mg电议
50mg电议
200mg电议

产品介绍

化学性质

Physical AppearanceA solid
StorageStore at -20°C
M.Wt490.55
Cas No.1092499-93-8
FormulaC27H28F2N6O
SynonymsBSK 805;BSK-805;BSK805;NVP-BSK 805
Solubility≥20.95 mg/mL in DMSO; ≥3.45 mg/mL in H2O with gentle warming and ultrasonic; ≥4.75 mg/mL in EtOH with gentle warming and ultrasonic
Chemical Name4-[[2,6-difluoro-4-[3-(1-piperidin-4-ylpyrazol-4-yl)quinoxalin-5-yl]phenyl]methyl]morpholine;dihydrochloride
Canonical SMILESC1CNCCC1N2C=C(C=N2)C3=NC4=C(C=CC=C4N=C3)C5=CC(=C(C(=C5)F)CN6CCOCC6)F.Cl.Cl
运输条件蓝冰运输或根据您的需求运输。
一般建议为了使其更好的溶解,请用37℃加热试管并在超声波水浴中震动片刻。不同厂家不同批次产品溶解度各有差异,仅做参考。若实验所需浓度过大至产品溶解极限,请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。溶液形式一般不宜长期储存,请尽快用完。

资料参考

NVP-BSK805 是一种强效的和选择性的JAK2抑制剂,IC50值为0.58 nM [ 1 ]。

Janus激酶2(JAK2)是JAK 家族的成员之一,并且是一种非受体酪氨酸激酶。通过激活信号转导及转录活化蛋白(STATs),调节细胞核中的信号转导。STATs随磷酸化作用形成二聚体并进入细胞核内以调节目标基因的激活[ 2 ]。

在JAK 放射滤膜结合激酶检测中,NVP-BSK805 抑制全长的野生型JAK2和JAK2V617F 酶,IC50 值分别为0.58 nM 和0.56 nM [ 1 ]。在JAK2表达的CHRF-288-11、SET-2和HEL细胞中,NVP-BSK805抑制STAT5a磷酸化[ 2 ]。

在注射有JAK2V617F 依赖型Ba/F3 细胞的SCID米色小鼠中,与对照组相比,NVP-BSK805 (150 mg/kg) 在6小时和12小时抑制近50%脾脏提取物中STAT5的磷酸化。在注射诱导瞬时红细胞增多症和脾肿大的重组人红细胞生成素(rhEpo)的大鼠中, NVP-BSK805 剂量依赖性地抑制脾中rhEpo诱导的STAT5磷酸化[ 1 ]。

参考文献:
[1].  Baffert F, Régnier CH, De Pover A, et al. Potent and selective inhibition of polycythemia by the quinoxaline JAK2 inhibitor NVP-BSK805. Mol Cancer Ther, 2010, 9(7): 1945-1955.
[2].  Ringel F, Kaeda J, Schwarz M, et al. Effects of Jak2 type 1 inhibitors NVP-BSK805 and NVP-BVB808 on Jak2 mutation-positive and Bcr-Abl-positive cell lines. Acta Haematol, 2014, 132(1): 75-86.

试验操作

激酶实验 [1]:

酶活性分析

构建含人JAK2激酶结构域(840 ~ 1132位氨基酸)的质粒pAcG2TtevJAK2。分别构建JAK3 (813 ~ 1124)、TYK2 (888 ~ 1187) 和JAK1 (866 ~ 1154) 质粒。根据产品手册 (BD Biosciences Pharmingen) 构建含BD BaculoGoldTM Bright线性DNA的融合杆状病毒,进行空斑实验和单一斑块病毒扩增实验。在27°C下,用100 mL加了Penicillin/Streptomycin溶液的ExCell420培养基 (JRH Biosciences Ltd)培养Sf9细胞48小时,使其表达Janus激酶结构域。在悬浮培养细胞的浓度为1 × 106时,进行感染。用可溶性蛋白的产量优化每个病毒的感染复数(MOI)。在MOI分别为1和0.5时,细胞表达人JAK2、JAK1、JAK3和TYK2激酶结构域。在27°C下,细胞于48小时后表达JAK2,于48或72小时表达JAK1、JAK3和TYK2。感染后48小时或72小时后,将100 mL表达培养液离心5分钟(3000 × g),收集细胞。在4°C下,用12 mL裂解缓冲液裂解细胞30分钟,缓冲液成分为50 mM Tris-HCl,pH 7.5,150 mM NaCl,2 mM EDTA,1 mM DTT,1 mM原钒酸钠,1 % Triton X-100,10 % 甘油,1 × 不含EDTA的蛋白酶完全抑制剂混合物 (Roche Diagnostics) 和12.5 U/mL Benzonase。14,000 × g离心45分钟,分离颗粒性不可溶物质。在4°C下,利用GST标记的亲和性纯化蛋白激酶结构域。将之前离心所得的上清与0.2 mL含50 % Glutathione Sepharose 4B的悬浮液置于4°C下孵育2小时,然后用1 mL含50 mM Tris-HCl,pH 7.5,150 mM NaCl,0.1 % Triton X-100,1 mM DTT和10 %甘油的缓冲液洗5次。用0.25 mL的洗脱缓冲液(50 mM Tris-HCl,pH 7.5,150 mM NaCl,0.1 % Triton X-100,1 mM DTT, 10%甘油,10 mM还原性L-谷胱甘肽)洗脱结合到胶上的蛋白,分5次洗脱,每次孵育10分钟。用Amicon Ultra-4离心超滤管浓缩洗脱液至1/5的体积。加入Brij35至其终浓度为0.1%,将蛋白分成小份,置于-80℃速冻保存。在上述储存条件下,其激酶活性能保持至少6个月。在含0.1 μM [γ33P]-ATP,1 mM MnCl2,5 mM MgCl2,30 μM合成多肽底物EQEDEPEGDYFEWLE,1 mM DTT,1 % DMSO,50 μg/mL BSA,0.01% Brij35和50 mM Tris-HCl pH 7.5的缓冲体系中,加入JAK激酶结构域,室温孵育30分钟。对于所有蛋白,ATP的浓度均低于其Km值。用XLfit? (型号205)的全局拟合功能以及逻辑斯谛方程对曲线进行非线性回归拟合。其它地方已介绍了全长野生型JAK2及其突变体V617F的表达与鉴定和激酶实验条件。NVP-BSK805的激酶选择性实验如下:在Caliper实验中,当多肽底物被磷酸化后,多肽底物在电场中会有不同的迁移速度,以此来检测激酶反应。由于多肽带有荧光标记,在毛细管系统中可以检测及定量多肽。用LC3000仪器 (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA) 对多肽的荧光进行定量。在激酶实验中,激酶的活性可以通过检测剩余的ATP数量来定量。在LanthaScreen? TR-FRET激酶实验中,铽元素作为镧系元素螯合物,结合抗磷酸化底物的抗体。

细胞实验 [1]:

细胞系

Ba/F3细胞

制备方法

溶于DMSO。若配制更高浓度的溶液,一般步骤如下:请将试管置于37℃加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20℃可放置数月。

反应条件

100 nM;72小时

实验结果

NVP-BSK805抑制JAK2V617F细胞 (Ba/F3) 生长,而且诱导细胞凋亡,其GI50在< 100 nM的浓度。

动物实验 [1]:

动物模型

rhEpo诱导的红血球增多症雌性BALB/c小鼠

给药剂量

50、75和100 mg/kg;口服给药;每日1次

实验结果

给予BALB/c小鼠25、50和100 mg/kg NVP-BSK805能抑制rhEpo诱导的STAT5磷酸化以及rhEpo介导的红细胞增多和脾肿大。

其它注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同,但仍处于实验系统误差的允许范围内。

References:

[1]. Baffert F, Régnier CH, De Pover A, et al. Potent and selective inhibition of polycythemia by the quinoxaline JAK2 inhibitor NVP-BSK805. Mol Cancer Ther, 2010, 9(7): 1945-1955.

生物活性

DescriptionNVP-BSK805是一种强效的和选择性的ATP竞争性JAK2抑制剂,IC50值为0.5 nM,比对JAK1、JAK3 和TYK2的选择性高20倍以上。
靶点JAK2     
IC500.5 nM