机体中存在多种抗氧化的大分子、小分子及酶类等，这些均可以清除体内产生的各种活性氧，从而阻止活性氧诱导的氧化应激的产生。一个体系内的各种抗氧化大分子、抗氧化小分子和酶的总体水平即体现了该体系内的总抗氧化能力。因此测定血清浆等体液鸡组织、细胞裂解液中的总抗氧化能力具有非常重要的意义。

测定原理
       在酸性条件下抗氧化物质可以还原 Fe3+-TPTZ 产生蓝色的 Fe2+-TPTZ，在 593nm 处读取吸光
度可以计算出样品中的总抗氧化能力。

试剂组成和配制
试剂一 检测缓冲液 ,15ml×1 瓶 ,-20°C保存一年
试剂二 基质液, 1.5ml×1 支, -20°C,避光保存一年
试剂三 底物液 ,1.5ml×1 支, -20°C,避光保存一年
FRAP工作液配置：按照试剂一:试剂二:试剂三 = 10:1:1 混匀充分，避光37°C孵育，现用现配，2 小时内用完。
试剂四 FeSO4-7H2O 标准品, 100mg ,-20°C保存一年
随试剂盒附送 96 孔酶标板一块

预期用途
       用于血清、血浆、组织匀浆、细胞（或细胞上清）、唾液、尿液中总抗氧化能力测定。

适用仪器：
       各种类型的酶标仪或者可以测定微量样本的分光光度计。

样本前处理
1、血清(浆)、唾液、尿液、细胞上清等液体样本：
       血液样本采集后需及时分离血清或血浆，避免溶血。唾液、尿液、细胞上清等直接取样进行测定。血浆建议肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜采用 EDTA。文献报道，人血清总抗氧化能力为0.5-2mM，人唾液总抗氧化能力为 0.3-1mM。
2、动(植)物组织样本:
       准确称取组织重量，按重量（g）:体积(ml)=1:4 的比例，加入 4 倍体积的生理盐水或者PBS，冰水浴条件下机械匀浆，以充分破碎细胞并释放其中的抗氧化物， 4°C，12000 转/分，离心 5 分钟，取上清测定。
3、细胞样本
       收集不少于 100 万细胞(建议细胞刮处理，不宜使用胰酶和 EDTA 消化)，加入 200μl 冰冷的 PBS，匀浆或超声以充分破碎细胞并释放其中的抗氧化物，4°C，12000 转/分，离心 5 分钟，取上清测定。

操作步骤:

37°C孵育 3-5min，波长 593nm（或在 585-605nm 内选），酶标仪读取各孔 OD 值.

不同浓度的标准品溶液配置：
       称取 27.8mg 本试剂盒提供的 FeSO4-7H2O，溶解并定容到 1ml，此时浓度即为 100mM。取适量 100mM FeSO4-7H2O 溶液稀释至 0.15、0.3、0.6、0.9、1.2 和 1.5mM。通常可以使用蒸馏水或样品配制溶液配制标准品。
       注 1：对于血清、血浆、唾液或尿液等液体样品推荐用蒸馏水或 PBS 配制标准品；对于细胞或组织样品，推荐用用于细胞或组织匀浆的匀浆介质配制标准品，其它样品参考前述方法。
       注 2：FeSO4 溶液宜新鲜配制使用。100mM FeSO4 溶液容易氧化产生三价铁盐，使溶液的颜色从最初的淡绿色逐渐转变为浅黄色。如果发现溶液的颜色已经呈现明显的黄色，应该弃用该溶液，并使用试剂盒提供的 FeSO4-7H2O 重新配制新鲜的 FeSO4 溶液。

注意事项
1、在酸性条件下呈蓝色或近蓝色的试剂对测定结果会产生干扰，需要尽量避免。
2、如样本中含有高浓度的铁盐或亚铁盐，都会干扰测定，由于在酸性条件可以抑制样品中内源性物质的干扰。血清(浆)中铁离子或者亚铁离子的总浓度总是低于 10μM，所以不会干扰到 FRAP 法测定。样本中含有少量的金属离子螯合剂也不会影响到测定。
3、样本中不能添加 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的物质，也不宜添加 Tween、Triton和 NP-40 等去垢剂。
4、样本如不能及时检测，建议-80°C冻存，在一个月内所测数据没有显著变化。
5、本试剂盒仅用于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品及药品。
6、试剂二对人体有刺激性，请穿实验服并带手套操作。