测定原理:
在碱性条件下,酚类物质将钨钼酸还原,产生蓝色化合物,在760nm 处有特征吸收峰,测760nm 处的吸光值,即可得样品总酚含量。
仪器设备(自备):
烘箱、粉碎仪、40目筛、超声破碎仪、研钵、离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿
试剂组成:(50T/24 样)
提取液:60%乙醇水溶液,自备;
试剂一:黄色液体8ml×1 瓶,4°C保存;
试剂二:无色液体15ml×1 瓶,4°C保存;
试剂三:2000μmol/L(300μg/L)标准品1ml×1 瓶,无色液体,4°C保存;
500μmol/L(75μg/L)标准品配置:取2000μmol/L(300μg/L)标准品按1:3的比例加入3倍体积的60%乙醇水溶液配置,现用现配。
操作步骤:
1、总酚提取:总酚提取详见试剂盒内说明书。
2、测定操作表:
| 空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管 |
60%乙醇水溶液(μl) | 50 |
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500μmol/L标准品(μl) |
| 50 |
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样本上清液(μl) |
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| 50 | 50 |
试剂一(μl) | 250 | 250 | 250 |
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混匀,室温静置2min
| 空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管 |
试剂二(μl) | 250 | 250 | 250 | 250 |
蒸馏水(μl) | 450 | 450 | 450 | 700 |
混匀,室温静置10 min,蒸馏水调零,波长760nm,1ml比色皿,测定各管吸光度值。
计算公式: