测定原理:
利用 80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开,直链淀粉与碘形成的络合物在 620nm 处有吸收峰。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、研钵、冰、乙醚和蒸馏水。
试剂组成和配制(50T/48 样):
试剂一:液体 50ml×1 瓶;4°C保存;
试剂二:乙醚 50ml×1 瓶;(自备)
试剂三:液体 50ml×1 瓶;4°C保存;
试剂四:液体 4ml×1 瓶; 4°C保存;
试剂五:液体 1ml×1 瓶;4°C保存。
淀粉提取:
称取 0.01~0.02g 烘干样本(建议称取约 0.01g)于研钵中研碎,加入 1ml 试剂一,充分匀浆后转移到 EP 管中,80°C水浴提取 30min,3000g,25°C离心 5min,弃上清,留沉淀,加入 1ml 试剂二(乙醚)振荡 5min,3000g,25°C离心 5min,弃上清,留沉淀,加入 1ml 试剂三充分溶解,90°C水浴 10min,冷却后待测。
检测步骤:
1、分光光度计调节波长至 620nm,蒸馏水调零;
2、操作表:
试剂名称(μl) | 空白管 | 测定管 |
提取样本 |
| 100 |
蒸馏水 | 100 |
|
试剂四 | 70 | 70 |
蒸馏水 | 600 | 600 |
试剂五 | 10 | 10 |
蒸馏水 | 220 | 220 |
混匀,620nm 处吸光值 A,计算ΔA=A 测定管-A 空白管。