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碱性木聚糖酶(BAX)活性检测试剂盒(可见分光光度法)
碱性木聚糖酶(BAX)活性检测试剂盒(可见分光光度法)图片
包装:50管/24样


产品介绍

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。产品货号:BA1170

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,碱性木聚糖酶(BAX)一般分离自最适生长pH为9-11的微生物。

BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品内容:

试剂名称规格保存条件
缓冲液液体50ml×1瓶2-8℃
试剂一液体10ml×1瓶2-8℃
试剂二液体15ml×1瓶2-8℃
标准品粉剂×1支2-8℃

溶液的配制:

1.标准品:10mg木糖,临用前加入667μL蒸馏水配制成100μmol/ml的木糖标准液。

需自备的仪器和用品:

天平、低温离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1.发酵液:发酵液于8000rpm,4℃,离心15min,取上清,作为待测样本。

2.组织样本:称约0.1g组织,加入1ml缓冲液,冰上充分研磨。8000rpm,4℃,离心15min,取上清蒸馏水稀释10倍待测。

3.酶干粉:称约1mg,加1ml缓冲液溶解,蒸馏水稀释10倍待测。

二、测定步骤

1.可见分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

2.2μmol/ml木糖标准品的制备:将标准品用蒸馏水稀释50倍即2μmol/ml的木糖标准溶液备用。

3.样本测定(在EP管中加入下列试剂)

试剂名称(μL)对照管测定管空白管标准管
样本200200--
2μmoL/ml木糖标准品---200
蒸馏水--200-
缓冲液300300300300
试剂一-200200200
混匀,50℃水浴中反应30min,立即沸水浴中10min灭活。(注意不要让盖子爆开,以免进水,改变了反应体系)
试剂一200---
试剂二300300300300
混匀,沸水浴中显色5min(注意不要让盖子爆开,以免进水改变了反应体系),冷却后尽快测定各管540nm下的吸光度,分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。

三、BAX活性计算:

1.发酵液BAX活力计算:

酶活定义50℃,pH 9.0条件下,每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(U/ml)=C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷T=0.067×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)

C标准:木糖标准溶液浓度,2μmoL/ml;T:反应时间,30min。

2.酶干粉BAX活力计算:酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力(U/mg)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V提取÷W1÷T=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷W1

10:样本稀释倍数,10倍;C标准:木糖标准溶液浓度,2μmoL/ml;V提取:加入缓冲液体积,1ml;W1:酶干粉重量,mg;T:反应时间,30min。

3.组织中BAX活力计算:

(1)按样本蛋白浓度计算:

酶活定义:50 ℃,pH 9.0条件下,每mg组织蛋白每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

ACX活力(U/mg prot)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V样品÷(V样品×Cpr)÷T=0.67×∆A测定÷∆A标准÷Cpr

(2)按样本质量计算:酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每克组织每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖

酶的活力单位。

BAX活力(U/g质重)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V提取÷W2÷T=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷W2

10:样本稀释倍数,10倍;C标准:木糖标准溶液浓度,2μmoL/ml;V提取:加入缓冲液体积,1ml;W2:样本鲜重,g;T:反应时间,30min;Cpr:样品蛋白浓度,mg/ml;V样品:加入的样品体积,0.2ml。

注意事项:吸光度变化应该控制在0.01~1之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相

应改变。

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