碱性木聚糖酶(BAX)活性检测试剂盒(可见分光光度法)
产品介绍
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。产品货号:BA1170 木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,碱性木聚糖酶(BAX)一般分离自最适生长pH为9-11的微生物。 BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算BAX活力。 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 产品内容:
溶液的配制: 1.标准品:10mg木糖,临用前加入667μL蒸馏水配制成100μmol/ml的木糖标准液。 需自备的仪器和用品: 天平、低温离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。 操作步骤: 一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 1.发酵液:发酵液于8000rpm,4℃,离心15min,取上清,作为待测样本。 2.组织样本:称约0.1g组织,加入1ml缓冲液,冰上充分研磨。8000rpm,4℃,离心15min,取上清蒸馏水稀释10倍待测。 3.酶干粉:称约1mg,加1ml缓冲液溶解,蒸馏水稀释10倍待测。 二、测定步骤 1.可见分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。 2.2μmol/ml木糖标准品的制备:将标准品用蒸馏水稀释50倍即2μmol/ml的木糖标准溶液备用。 3.样本测定(在EP管中加入下列试剂)
三、BAX活性计算: 1.发酵液BAX活力计算: 酶活定义50℃,pH 9.0条件下,每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。 BAX活力(U/ml)=C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷T=0.067×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白) C标准:木糖标准溶液浓度,2μmoL/ml;T:反应时间,30min。 2.酶干粉BAX活力计算:酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。 BAX活力(U/mg)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V提取÷W1÷T=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷W1 10:样本稀释倍数,10倍;C标准:木糖标准溶液浓度,2μmoL/ml;V提取:加入缓冲液体积,1ml;W1:酶干粉重量,mg;T:反应时间,30min。 3.组织中BAX活力计算: (1)按样本蛋白浓度计算: 酶活定义:50 ℃,pH 9.0条件下,每mg组织蛋白每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。 ACX活力(U/mg prot)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V样品÷(V样品×Cpr)÷T=0.67×∆A测定÷∆A标准÷Cpr (2)按样本质量计算:酶活定义:50℃,pH9.0条件下,每克组织每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖 酶的活力单位。 BAX活力(U/g质重)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V提取÷W2÷T=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷W2 10:样本稀释倍数,10倍;C标准:木糖标准溶液浓度,2μmoL/ml;V提取:加入缓冲液体积,1ml;W2:样本鲜重,g;T:反应时间,30min;Cpr:样品蛋白浓度,mg/ml;V样品:加入的样品体积,0.2ml。 注意事项:吸光度变化应该控制在0.01~1之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相 应改变。 用户评论 产品评分 目前评分共0人 产品质量
售后服务
易用性
性价比
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