磷脂酶C(PLC)检测试剂盒(微量法)
产品介绍
磷脂酶C(EC 3.1.4.3)是一种水解甘油磷酸酯C3位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶,广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中,在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。 磷脂酶C催化水解NPPC产生对硝基苯酚,在410nm处有特征吸收峰。 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 产品内容:
需自备的仪器和用品: 天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。 操作步骤: 一、酶液提取 1.组织:按照质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约01g,加入1ml提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1ml试剂一。 2.细胞:按照细胞数量(104个);提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1ml试剂一。 3.血清:直接测定。 二、测定操作
三、酶活计算公式 a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线:y=0.0191x-0.0103,R2=0.9991 1.按照蛋白浓度计算 酶活性定义:每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷0.0191×V反总÷(V样×Cpr)÷T=17.45×(△A+0.0103)÷Cpr 2.按照样本质量计算 酶活性定义:每克组织每分钟水解NPPC产生lnmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC活性(nmol/min/g鲜重)=(△A+0.0103)÷0.0191×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T=17.45×(△A+0.0103)÷W 3.按照细胸数量计算 酶活性定义:每104个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC活性(nmol/min/104cell)=(△A+0.0103)÷0.0191×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T=17.45×(△A+0.0103)÷细胞数量 4.按照液体体积计算 酶活性定义:每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC活性(nmol/min/ml)=(△A+0.0103)÷0.0191×V反总÷V样÷T=17.45×(△A+0.0103) V反总:反应总体积,0.2ml;V样:加入样本体积,0.02ml;V样总:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W:样本质量,g;T:反应时间,30min b.用96孔板测定的计算公式如下 标准曲线:y=0.0095x-0.0103,R2=0.9991 1.按照蛋白浓度计算 酶活性定义:每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷0.0095×V反总÷(V样×Cpr)÷T=35.09×(△A+0.0103)÷Cpr 2.按照样本质量计算 酶活性定义:每克组织每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC活性(nmol/min/g鲜重)=(△A+0.0103)÷0.0095×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T=35.09×(△A+0.0103)÷W 3.按照细胞数量计算 酶活性定义:每104个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC活性(nmol/min/104cell)=(△A+0.0103)-0.0095×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T=35.09×(△A+0.0103)÷细胞数量 4.按照液体体积计算 酶活性定义:每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC活性(nmol/min/ml)=(△A+0.0103)÷0.0095×V反总÷V样÷T=35.09×(△A+0.0103) V反总:反应总体积,0.2ml;V样:加入样本体积,0.02ml;V样总:加入提取液体积,1ml ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W:样本质量,g;T:反应时间,30min。 用户评论 产品评分 目前评分共0人 产品质量
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